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公开(公告)号：CN114317593A
公开(公告)日：2022-04-12
申请号：CN202111660862.3
申请日：2021-12-31
Applicant: 北京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种单分子超分辨显微技术观察植物原生质体膜蛋白动态的方法，包括步骤一，转基因材料的获得；步骤二，原生质体的提取；步骤三，结构光照明显微镜成像观察；步骤四，参数信息的计算；其中在上述步骤一中，首先通过PCR技术扩增目的基因条带，然后通过双酶切的方法与真核表达载体35S::pCAMBIA2300‑GFP进行连接，通过筛选获得转基因拟南芥植株；使用结构光照明显微镜进行成像，结构光照明显微镜具有时间分辨率高、光毒性和光漂白性小等众多优点，能够在活体状态下，实时观察细胞膜蛋白的动态变化等特征；通过结构光照明显微镜的观察，可以真实地反映植物细胞膜蛋白分子的运动状态，并可以获得膜蛋白运动参数等信息。
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公开(公告)号：CN108575740B
公开(公告)日：2020-12-01
申请号：CN201810162059.9
申请日：2018-02-26
Applicant: 北京林业大学
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明公开了一种杨树高效体胚发生与植株建成的方法。本发明提供了杨树的组织培养方法，包括：1)将取自于杨树的外植体接种于诱导培养基(含1.0‑2.0mg/L 2,4‑D和0.1mg/L KT)上进行培养，获得愈伤组织；2)将所述愈伤组织接种于分化培养基上进行培养，得到不定芽；3)将所述不定芽接种于生根培养基上进行培养，得到生根的幼苗。本发明所提供的杨树的组织培养方法具有以下优点：培养周期短、重复性高；设置不同的激素组合，提高杨树体胚的发生；可获得大量的再生植株。本发明为深入研究植物细胞分化、发育等提供了理想的实验体系，为杨树的细胞工程、基因工程以及杨树遗传改良等相关研究提供重要平台。
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公开(公告)号：CN108195801A
公开(公告)日：2018-06-22
申请号：CN201711146160.7
申请日：2017-11-17
Applicant: 北京林业大学
IPC: G01N21/64
Abstract: 单分子水平实时观测植物气孔保卫细胞膜蛋白分布和动态的方法，涉及生物技术领域。该方法包括以下步骤：A、获得荧光标记目的基因的转基因材料；B、以全内反射荧光显微镜获取保卫细胞膜蛋白的实时影像；C、通过Image J软件将所得时间序列图像进行处理；D、通过Matlab R2014a对目的蛋白进行单颗粒追踪分析，确定单个蛋白聚合体的动态；E、计算气孔保卫细胞膜蛋白在细胞质膜上的停留时间；F、对目的蛋白的停留时间参数进行高斯拟合，确定目的蛋白的停留时间及变化。此方法具有提高成像的信噪比，可进行高分辨率的观测，成像速度快，活体可视化及可重复性高的优点。本发明在植物基因功能研究中具有实际应用价值。
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公开(公告)号：CN119876188A
公开(公告)日：2025-04-25
申请号：CN202510361379.7
申请日：2025-03-26
Applicant: 北京林业大学
IPC: C12N15/29 , C07K14/415 , C12Q1/6895 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种Pt6G00980基因及其蛋白在判定油松种子萌发活力中的应用，涉及生物技术领域。该基因的表达量与萌发活力呈负相关，随着油松种子的萌发而逐渐降低。本发明还提供检测该基因的引物组，通过使用本发明提供的引物组对待测样本的cDNA和参考样本的cDNA进行定量PCR扩增，并比较待测样本和参考样本中Pt6G00980基因的表达量，能够实现对待测样本萌发活力的准确判定。与传统的依赖观察种子萌发率及生理指标的分辨方法相比，本发明提供的技术方案可准确反映出油松种子的萌发活力，且精度更高，科学性更强，可重复性好。
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公开(公告)号：CN118853689B
公开(公告)日：2025-02-11
申请号：CN202410908796.4
申请日：2024-07-08
Applicant: 北京林业大学
IPC: C12N15/29 , C07K14/415 , C12Q1/6895 , C12Q1/6851 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了Pt9G10460基因及其编码蛋白在判断油松幼苗是否进入暗形态建成期中的应用。属于农业生物技术领域。本发明提供了标记基因Pt9G10460及其编码蛋白，该基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。该基因及其编码蛋白均能用于判断油松幼苗是否进入暗形态建成期。本发明还提供了特异性扩增上述基因的引物对，利用该引物对能特异性扩增Pt9G10460基因。使用qRT‑PCR技术分析Pt9G10460基因在油松不同状态组织中的表达量，能够高效、准确地判断待测样本是否处于暗形态建成期。实验证明，本发明提供的技术方案可准确判断油松幼苗是否进入暗形态建成期，且精度更高，科学性更强，可重复性好。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN118853689A
公开(公告)日：2024-10-29
申请号：CN202410908796.4
申请日：2024-07-08
Applicant: 北京林业大学
IPC: C12N15/29 , C07K14/415 , C12Q1/6895 , C12Q1/6851 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了Pt9G10460基因及其编码蛋白在判断油松幼苗是否进入暗形态建成期中的应用。属于农业生物技术领域。本发明提供了标记基因Pt9G10460及其编码蛋白，该基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。该基因及其编码蛋白均能用于判断油松幼苗是否进入暗形态建成期。本发明还提供了特异性扩增上述基因的引物对，利用该引物对能特异性扩增Pt9G10460基因。使用qRT‑PCR技术分析Pt9G10460基因在油松不同状态组织中的表达量，能够高效、准确地判断待测样本是否处于暗形态建成期。实验证明，本发明提供的技术方案可准确判断油松幼苗是否进入暗形态建成期，且精度更高，科学性更强，可重复性好。
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公开(公告)号：CN117887734B
公开(公告)日：2024-05-28
申请号：CN202410288165.7
申请日：2024-03-14
Applicant: 北京林业大学
IPC: C12N15/29 , C07K14/415 , C12Q1/6895 , C12Q1/686
Abstract: 本发明属于农业生物技术领域，具体涉及一种Pt9G41650基因及其蛋白在判定油松种子休眠程度中的应用。本发明提供了Pt9G41650基因及其蛋白，Pt9G41650基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，该基因及其蛋白均能用于判定油松种子的休眠程度。此外，本发明还提供了特异性扩增上述基因的引物对，使用该引物对能特异性扩增Pt9G41650基因，并通过比较待测样本和参考样本中Pt9G41650基因的表达量，能够实现对待测样本休眠程度的准确判定。实验证明，本发明提供的技术方案可准确反映出油松种子的休眠程度，且精度更高，科学性更强，可重复性好。
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公开(公告)号：CN115995269A
公开(公告)日：2023-04-21
申请号：CN202211547264.X
申请日：2022-12-05
Applicant: 北京林业大学
Abstract: 本发明提供了一种挖掘油松年龄相关基因的方法，属于基因工程技术领域，包括：构建不同年龄的油松茎段的转录组数据集，获得原始数据；分析差异表达基因；利用差异表达基因确定皮尔逊相关系数的分界值，通过PCC的分界值构建多个基因表达网络；对基因表达网络中的TF表达量进行单调性测绘，以确定种子基因；将种子基因进行BFS算法运算，获得多个时序层级基因表达网络模型；根据获得的时序层级基因表达网络模型中出现的核心连接点基因，作为油松年龄相关基因。本发明成功挖掘出与年龄性状密切相关的基因DAL35，为分析油松老化分子机制奠定了基础，也为改善油松老化现象提供了遗传资源和技术支持。
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公开(公告)号：CN112662703B
公开(公告)日：2022-12-20
申请号：CN202011593169.4
申请日：2020-12-29
Applicant: 北京林业大学
Abstract: 本发明涉及生物成像技术领域，具体涉及一种利用荧光漂白恢复技术观察植物细胞核蛋白动态的方法。所述方法包括：步骤一，获得转基因植物；步骤二，共聚焦成像；步骤三，荧光漂白恢复观察；步骤四，参数信息的计算。本发明实现了FRAP技术，在植物细胞核蛋白动态研究中的首次尝试和应用，并且经过条件的摸索，得出了适合植物细胞核荧光漂白后恢复的最佳反应条件和参数。而且本发明中的方法对样品的光毒性伤害小，能够在活体状态下、实时观察细胞核蛋白的动态以及运动特征，同时具有较高的重复性。
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公开(公告)号：CN112730352A
公开(公告)日：2021-04-30
申请号：CN202011443699.0
申请日：2020-12-08
Applicant: 北京林业大学
Abstract: 本发明公开了实时观察植物细胞核蛋白的结构、面积和空间分布的方法，包括步骤一，转基因材料获得；步骤二，成像观察；步骤三，分析处理；步骤四，计算参数信息；其中在上述步骤一中，首先通过PCR技术扩增出目的基因条带，然后通过同源重组的方法将目的基因连接到真核表达载体pCM2300中；ZeissLSM880Airyscan快速超分辨激光共聚焦显微镜的Airyscan模式下成像具有超高分辨率，可以对植物细胞核内蛋白质的结构进行超高分辨率的成像观察；对细胞的光毒性伤害小，能够在活体状态下、原位观察细胞核蛋白的面积和分布等特征；成像速度快，能够真实地反映植物细胞核内蛋白分子的状态，并在单分子水平上对细胞核蛋白的面积异质性进行分析；重复性高。
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