公开(公告)号：CN116004716A

公开(公告)日：2023-04-25

申请号：CN202211107250.6

申请日：2022-09-09

申请人： 华中农业大学

发明人： 阮进学 ,  赵书红 ,  苏寅钰 ,  李新云 ,  熊友才 ,  韩晓松 ,  何瑞高 ,  王晓萱 ,  席晓宁 ,  杨致远 ,  余梅 ,  谢胜松 ,  刘向东

IPC分类号： C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C07K19/00 ,  C12N15/62 ,  C12N15/113 ,  C12N5/10

摘要： 本发明公开了一种利用epi‑dCas9‑FokI系统进行高效基因编辑的方法，具体地公开了一种将附着体元件（EBNA1/oriP）介导融合蛋白dCas9‑FokI表达进行基因编辑的方法，所述epi‑dCas9‑FokI系统由于使用二聚形式产生切割的FokI核酸酶，因此不会破坏sgRNA的识别序列，再利用EBNA1/oriP附着体介导持续表达dCas9‑FokI核酸酶，持续切割未发生敲除的序列，达到提高敲除效率和增加对未发生目的编辑的靶位点进行重复多次编辑的目的。利用该方法可以高效敲除特定核苷酸序列，为基因功能研究提供可行的方法和强大的基因编辑工具。