公开(公告)号：CN117965587A

公开(公告)日：2024-05-03

申请号：CN202410083566.9

申请日：2024-01-19

申请人： 华东理工大学

发明人： 张舰 ,  魏东芝 ,  蒋怀谷 ,  陈安祥

IPC分类号： C12N15/70 ,  C12N15/31 ,  C07K14/435 ,  C12N9/10 ,  C12N9/12 ,  C12N9/04 ,  C07K14/56 ,  C12R1/19

摘要： 本发明涉及基因工程技术领域，尤其是涉及一种含hok/sok基因的菌株及其制备与应用。本发明通过将hok/sok基因片段插入重组蛋白表达载体中，并优化基因插入位点，筛选到在重组大肠杆菌高密度发酵过程中质粒稳定性有显著提高的高产菌株。高密度发酵结束后，在有抗生素添加情况下质粒保有率为100％；在不添加抗生素情况下，质粒保有率为65％，重组蛋白表达量提高了40％。与现有技术相比，本发明的质粒稳定系统应用于大肠杆菌高密度发酵过程中显著提高了生产效率，具有很好的应用前景。

公开(公告)号：CN103897052B

公开(公告)日：2017-01-04

申请号：CN201410119501.1

申请日：2014-03-27

申请人： 华东理工大学

发明人： 孙爱友 ,  魏东芝 ,  白超刚 ,  王晓娟 ,  张舰 ,  吕欣欣

IPC分类号： C07K14/54 ,  C12N15/24 ,  C12N15/10 ,  C12N15/70 ,  A61K38/20 ,  A61P35/00

摘要： 本发明涉及一种白细胞介素-24突变体及其制备方法和应用，白细胞介素-24突变体基因序列如SEQ ID NO：2所示，氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；利用如SEQ ID NO：2所示的基因序列，用基因工程菌重组表达白细胞介素-24，发酵所得菌体经破碎离心得到含有白细胞介素-24突变体的包涵体，所得包涵体经包涵体洗涤缓冲液洗涤两次或多次，并对包涵体进行变性与复性，得到白细胞介素-24纯度达79％的白细胞介素-24突变体。与现有技术相比，本发明制备得到了白细胞介素-24突变体，且获得的白细胞介素-24在治疗恶性黑色素瘤疾病表现出较大的应用前景。

公开(公告)号：CN102321697A

公开(公告)日：2012-01-18

申请号：CN201110202202.0

申请日：2011-07-19

申请人： 华东理工大学

发明人： 孙爱友 ,  魏东芝 ,  董玉国 ,  王丽华 ,  徐瑞 ,  张舰

IPC分类号： C12P17/04 ,  C12R1/80

摘要： 本发明涉及后期补加前体物利用短密青霉高效累积生产霉酚酸的方法，将短密青霉在PDA斜面基上培养10天，用30％甘油洗脱成为孢子悬浊液，按2wt％含量将孢子悬浊液接种到种子培养基上，控制温度为28℃，活化培养72h，然后将活化后的短密青霉接种在发酵罐中，采用优化后的葡萄糖-甘氨酸液体培养基进行发酵培养，控制温度为28℃，发酵后期补加甲硫氨酸，发酵得到霉酚酸。与现有技术相比，本发明发酵周期在192小时以内，最高产量可达5.0g/L，比分批发酵提高约30％。这种优化碳氮源后期补加前体物的发酵策略控制简单、霉酚酸发酵周期短、产量高，具有较大的工业化应用前景。

公开(公告)号：CN103897052A

公开(公告)日：2014-07-02

申请号：CN201410119501.1

申请日：2014-03-27

申请人： 华东理工大学

发明人： 孙爱友 ,  魏东芝 ,  白超刚 ,  王晓娟 ,  张舰 ,  吕欣欣

IPC分类号： C07K14/54 ,  C12N15/24 ,  C12N15/10 ,  C12N15/70 ,  A61K38/20 ,  A61P35/00

CPC分类号： C07K14/54 ,  A61K38/00

摘要： 本发明涉及一种白细胞介素-24突变体及其制备方法和应用，白细胞介素-24突变体基因序列如SEQ？ID？NO：2所示，氨基酸序列如SEQ？ID？NO：1所示；利用如SEQ？ID？NO：2所示的基因序列，用基因工程菌重组表达白细胞介素-24，发酵所得菌体经破碎离心得到含有白细胞介素-24突变体的包涵体，所得包涵体经包涵体洗涤缓冲液洗涤两次或多次，并对包涵体进行变性与复性，得到白细胞介素-24纯度达79％的白细胞介素-24突变体。与现有技术相比，本发明制备得到了白细胞介素-24突变体，且获得的白细胞介素-24在治疗恶性黑色素瘤疾病表现出较大的应用前景。

公开(公告)号：CN103864914A

公开(公告)日：2014-06-18

申请号：CN201410119737.5

申请日：2014-03-27

申请人： 华东理工大学

发明人： 孙爱友 ,  魏东芝 ,  王学东 ,  王晓娟 ,  白超刚 ,  张舰 ,  吕欣欣

IPC分类号： C07K14/54 ,  C12N15/70

CPC分类号： C07K14/54 ,  C12N15/70

摘要： 本发明涉及一种高纯度白细胞介素-24包涵体的制备方法，包括以下步骤：制备含有白细胞介素-24基因的重组大肠杆菌；重组大肠杆菌进行发酵培养；发酵培养后得到的菌体进行超声破碎得到包涵体；对包涵体进行洗涤；对洗涤后的包涵体进行变性与复性，得到白细胞介素-24蛋白。与现有技术相比，本发明通过对大肠杆菌生产白细胞介素-24培养条件进行优化，获得较疏松的白细胞介素-24包涵体结构，提高了蛋白在高浓度下的复性的效率，同时，本发明方法使白细胞介素-24的变性效率和复性效率分别提高了50.52％和83.78％，操作简单，节约了生产成本。这种通过优化培养条件来简化其纯化过程的方法可适用于其它有类似包涵体结构特点的蛋白。

公开(公告)号：CN102321697B

公开(公告)日：2013-07-24

申请号：CN201110202202.0

申请日：2011-07-19

申请人： 华东理工大学

发明人： 孙爱友 ,  魏东芝 ,  董玉国 ,  王丽华 ,  徐瑞 ,  张舰

IPC分类号： C12P17/04 ,  C12R1/80

摘要： 本发明涉及后期补加前体物利用短密青霉高效累积生产霉酚酸的方法，将短密青霉在PDA斜面基上培养10天，用30％甘油洗脱成为孢子悬浊液，按2wt％含量将孢子悬浊液接种到种子培养基上，控制温度为28℃，活化培养72h，然后将活化后的短密青霉接种在发酵罐中，采用优化后的葡萄糖-甘氨酸液体培养基进行发酵培养，控制温度为28℃，发酵后期补加甲硫氨酸，发酵得到霉酚酸。与现有技术相比，本发明发酵周期在192小时以内，最高产量可达5.0g/L，比分批发酵提高约30％。这种优化碳氮源后期补加前体物的发酵策略控制简单、霉酚酸发酵周期短、产量高，具有较大的工业化应用前景。