公开(公告)号：CN114457121A

公开(公告)日：2022-05-10

申请号：CN202210212412.6

申请日：2022-03-04

申请人： 西南大学

发明人： 徐汉福 ,  曾文慧 ,  罗琴 ,  刘荣鹏 ,  欧瑶 ,  马艳 ,  马静文 ,  胡杰 ,  唐艺芸 ,  王浩淼 ,  向仲怀

IPC分类号： C12N15/89 ,  C12N15/12 ,  C12N15/85 ,  C07K14/435 ,  A01K67/04

摘要： 本发明提供一种利用BmYki及其异构体定向抑制家蚕丝素基因的转基因方法及其家蚕品种，其通过GAL4/UAS双元表达系统，在后部丝腺中特异过表达BmYki及其异构体，Yki及其异构体均导致后部丝腺的3个丝素蛋白编码基因fibH、fibL、P25显著被抑制，依据转基因方法所生产的蚕的蚕茧为薄茧，且后代可育。本发明获得了4种过表达BmYki异构体的UAS转基因表达载体，2种用后部丝腺启动子直接启动表达BmY1314的转基因表达载体；本发明提供的4种在家蚕后部丝腺中过表达BmYki异构体的转基因家蚕及2种用后部丝腺启动子直接启动表达BmY1314的转基因家蚕在不同程度上抑制丝素基因的表达。

公开(公告)号：CN114480500B

公开(公告)日：2023-09-08

申请号：CN202210214443.5

申请日：2022-03-04

申请人： 西南大学

发明人： 徐汉福 ,  刘荣鹏 ,  王浩淼 ,  马艳 ,  唐艺芸 ,  胡杰 ,  欧瑶 ,  马静文 ,  向仲怀

IPC分类号： C12N15/85 ,  C12N15/12 ,  C12N15/66 ,  A01K67/033

摘要： 本发明提供了一种转基因丝胶茧生物反应器的构建方法，其通过转基因技术获得两种丝胶茧系统，选取丝胶茧中丝胶含量较多的一种的丝胶茧为生物反应器，通过以Ser1为启动子，增强型绿色荧光蛋白EGFP为目的基因，构建转基因表达载体并且获得转基因家蚕。本发明根据利用piggyBac介导的家蚕遗传改良技术，利用转基因丝胶茧作为注射受体，在家蚕中部丝腺表达外源蛋白，使外源蛋白的提取和纯化更加容易，为探索开发利用丝胶茧受体表达重组蛋白提供素材基础。

公开(公告)号：CN114540364B

公开(公告)日：2023-07-18

申请号：CN202210213529.6

申请日：2022-03-04

申请人： 西南大学

发明人： 徐汉福 ,  曾文慧 ,  欧瑶 ,  罗琴 ,  刘荣鹏 ,  马艳 ,  马静文 ,  唐艺芸 ,  胡杰 ,  陈玉琴 ,  向仲怀

IPC分类号： C12N15/12 ,  C12N15/85 ,  C12N15/55 ,  A01K67/033

摘要： 本发明提供一种提高蚕茧中丝素蛋白含量的转基因方法及其家蚕品种，提高蚕茧中丝素蛋白含量的转基因方法通过GAL4/UAS系统，分别构建了在家蚕后部丝腺中特异性过表达BmDimm和特异性敲除BmYki和BmSd，均获得了后部丝腺增大的转基因家蚕；通过在家蚕后部丝腺中特异性敲除BmYki能提高家蚕的丝素蛋白含量，或通过在家蚕后部丝腺中特异性敲除BmSd能提高家蚕的丝素蛋白含量，或通过在家蚕后部丝腺中特异性过表达BmDimm能提高家蚕的丝素蛋白含量。本发明根据家蚕基因组序列数据库中家蚕丝腺表达内源基因的序列密码子偏好性，对Cas9蛋白的基因序列进行了优化设计，使Cas9基因更有利于在家蚕个体丝腺中表达；通过GAL4/UAS系统及CRISPR/Cas9基因编辑技术对家蚕丝腺进行了组织特异性的敲除和过表达。

公开(公告)号：CN114634153B

公开(公告)日：2024-09-27

申请号：CN202210257774.7

申请日：2022-03-13

申请人： 中国科学院重庆绿色智能技术研究院 ,  西南大学

发明人： 周大明 ,  王赟姣 ,  张紫茵 ,  徐汉福 ,  唐艺芸 ,  胡杰 ,  马艳 ,  刘荣鹏 ,  王德强 ,  袁家虎 ,  向仲怀

IPC分类号： B81C1/00 ,  G03F7/20 ,  B01L3/00

摘要： 本发明提供了一种阵列纳米沟道的制备方法与蚕丝蛋白薄膜，所述阵列纳米沟道的制备方法包括以下步骤：步骤S1，提取蚕丝蛋白，通过将蚕丝溶解或悬浮在水中，进而提取一种或多种蚕丝蛋白溶液；步骤S2，基于步骤S1得到的蚕丝蛋白溶液制备蚕丝蛋白薄膜，将一种所述溶液形成薄膜；步骤S3，基于步骤S2得到的制备蚕丝蛋白薄膜层；其中将蚕丝蛋白薄膜蒸发水，由此形成蚕丝蛋白薄膜层；步骤S4，制备多层阵列纳米沟道。本发明用蚕丝蛋白作为沟道的构建材料，它具有很好的生物兼容性，可以进一步对沟道内表面的蛋白分子做特定的生物修饰，并用于相关的生物分子检测，比如药物的手性识别和对映体分离。

公开(公告)号：CN118126930A

公开(公告)日：2024-06-04

申请号：CN202410225247.7

申请日：2024-02-29

申请人： 西南大学

发明人： 马艳 ,  李志伟 ,  徐小清 ,  唐艺芸 ,  李青俊 ,  胡杰 ,  向仲怀 ,  徐汉福

IPC分类号： C12N5/071

摘要： 本发明公开了一种蚕类绢丝腺单细胞悬液的制备方法，其通过对蚕类个体进行净化处理，解剖完整洁净丝腺组织，采用适用于蚕类绢丝腺特征的单细胞(核)解离技术消化绢丝腺组织并获得高质量和产量的单细胞(核)悬液。本发明利用蚕类(包括家蚕、野蚕、柞蚕、樗蚕、柳蚕、蓖麻蚕)绢丝腺作为受体，创新采用胶原酶和木瓜蛋白酶联用的组织消化技术，对绢丝腺进行组织消化，获得的单细胞悬液具有较高的细胞活率；创新采用的冷冻裂解法获得的细胞核悬液具有较高得核率。本发明制备的单细胞(核)悬液的方法低成本、重复性好、成功率高，适用于单细胞(核)转录组测序的样本制备，同时也可以用于探索蚕类绢丝腺细胞系建立及细胞(核)分析。

公开(公告)号：CN114540420B

公开(公告)日：2024-03-19

申请号：CN202210213288.5

申请日：2022-03-04

申请人： 西南大学

发明人： 马艳 ,  徐汉福 ,  曾文慧 ,  罗琴 ,  欧瑶 ,  刘荣鹏 ,  唐艺芸 ,  胡杰 ,  马静文 ,  李青俊 ,  向仲怀

IPC分类号： C12N15/85 ,  C12N15/12 ,  C12N15/65 ,  C12N15/113 ,  A01K67/04

摘要： 本发明提供一种通过特异上调家蚕蜕皮激素应答因子制备转基因丝胶茧的方法及其家蚕品种，其通过在家蚕PSG特异上调家蚕蜕皮激素应答因子，家蚕蜕皮激素应答因子包括BmEcRA、BmUSP、BmE74、BmHR4、BmHR3、BmFtz‑f1，使得家蚕PSG不同程度的退化，影响或阻止了丝素蛋白的合成，通过特异上调家蚕蜕皮激素应答因子制备转基因丝胶茧的方法获得的转基因家蚕具有只生产丝胶蛋白的特性，使其只能生产丝胶茧。该家蚕的蚕丝可作为一种良好的材料使用于医学、军工、光电等各个领域，具有重要的应用价值。

公开(公告)号：CN114480509B

公开(公告)日：2023-09-05

申请号：CN202210214552.7

申请日：2022-03-04

申请人： 西南大学

发明人： 徐汉福 ,  曾文慧 ,  刘荣鹏 ,  马艳 ,  罗琴 ,  欧瑶 ,  马静文 ,  唐艺芸 ,  胡杰 ,  向仲怀

IPC分类号： C12N15/89 ,  C12N15/12 ,  C12N15/85 ,  C07K14/435 ,  A01K67/04

摘要： 本发明提供了一种诱导家蚕泌丝器官完全退化制备纯丝胶茧的转基因方法及其家蚕品种，其通过改造的GAL4/UAS高效双元表达系统，在家蚕后部丝腺细胞中特异上调BmFMBP1、BmE93和BmSdRFP基因导致后部丝腺器官完全退化消失，但仍能正常吐丝结茧。本发明以GAL4/UAS双元表达系统，在家蚕后部丝腺中特异性过表达BmFMBP1、BmE93和BmSdRFP基因，发现双荧光阳性后代的后部丝腺完全退化，但是亦有吐丝结茧能力，且结茧为纯丝胶茧，且后代可育，为新型生物功能材料提供了有力的材料基础。

公开(公告)号：CN114457121B

公开(公告)日：2023-08-29

申请号：CN202210212412.6

申请日：2022-03-04

申请人： 西南大学

发明人： 徐汉福 ,  曾文慧 ,  罗琴 ,  刘荣鹏 ,  欧瑶 ,  马艳 ,  马静文 ,  胡杰 ,  唐艺芸 ,  王浩淼 ,  向仲怀

IPC分类号： C12N15/89 ,  C12N15/12 ,  C12N15/85 ,  C07K14/435 ,  A01K67/04

摘要： 本发明提供一种利用BmYki异构体定向抑制家蚕丝素基因的转基因方法，其通过GAL4/UAS双元表达系统，在后部丝腺中特异过表达BmYki异构体，BmYki异构体均导致后部丝腺的3个丝素蛋白编码基因fibH、fibL、P25显著被抑制，依据转基因方法所生产的蚕的蚕茧为薄茧，且后代可育。本发明获得了4种过表达BmYki异构体的UAS转基因表达载体，2种用后部丝腺启动子直接启动表达BmY1314的转基因表达载体；本发明提供的4种在家蚕后部丝腺中过表达BmYki异构体的转基因家蚕及2种用后部丝腺启动子直接启动表达BmY1314的转基因家蚕在不同程度上抑制丝素基因的表达。

公开(公告)号：CN114609863A

公开(公告)日：2022-06-10

申请号：CN202210232925.3

申请日：2022-03-09

申请人： 西南大学 ,  中国科学院重庆绿色智能技术研究院

发明人： 徐汉福 ,  唐艺芸 ,  王赟娇 ,  胡杰 ,  周大明 ,  张紫茵 ,  马艳 ,  马静文 ,  穆园园 ,  王德强 ,  代方银 ,  周泽扬 ,  袁家虎 ,  向仲怀

IPC分类号： G03F7/004 ,  C07K14/435 ,  C07K1/14

摘要： 本发明提供一种基于二化和多化家蚕品种的全水基蚕丝光刻胶及其制备方法，所述光刻胶包括二化家蚕品种秋白、夏芳或多化家蚕品种305的家蚕丝素蛋白和水溶剂；其制备方法适用于多种二化和多化家蚕品种，本发明所选3种家蚕品种(秋白、夏芳、305)，其具有利于饲养、吐丝量大、丝质量高等特点，其蚕丝蛋白易于提取，高效，并且其丝蛋白构象可通过辐射转变，具有电子束、离子束两用，以及正负两用性。此外，该光刻胶仅以水作为显影液和溶剂，对环境友好、对人体无害，最大程度上满足了绿色微纳加工的需求，对于蚕桑产业拓展应用具有重要价值。

公开(公告)号：CN114540421A

公开(公告)日：2022-05-27

申请号：CN202210213352.X

申请日：2022-03-04

申请人： 西南大学

发明人： 徐汉福 ,  刘荣鹏 ,  曾文慧 ,  马艳 ,  罗琴 ,  欧瑶 ,  马静文 ,  唐艺芸 ,  胡杰 ,  向仲怀

IPC分类号： C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N15/55 ,  A01K67/04

摘要： 本发明提供了一种针对家蚕MSG和PSG表达基因的可控编辑方法，其通过GAL4/UAS系统，分别构建了若干个在家蚕MSG中特异启动表达的GAL4表达载体和多个在家蚕PSG中特异启动表达的GAL4表达载体，通过将表达Cas9基因序列与U6驱动表达的gRNA靶点一起串联在UAS序列下游，最终构建成UAS表达载体，进而利用GAL4/UAS遗传操作工具达到家蚕基因的可控编辑。本发明根据家蚕基因组序列数据库中家蚕基因的序列密码子偏好性，对Cas9蛋白的基因序列进行了优化设计，使Cas9基因更有利于在家蚕丝腺中高效表达。本发明利用该可控的基因编辑技术可精准研究家蚕丝腺基因的功能和创制更多的生物遗传资源。