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公开(公告)号：CN111088039B
公开(公告)日：2022-03-08
申请号：CN201911333073.1
申请日：2019-12-20
申请人： 东南大学
摘要： 本发明公开了免标记的荧光探针及其制备方法和应用，所述免标记的荧光探针的制备方法如下：将金纳米粒子与ssDNA溶液混合后涡旋5~10秒得到混合溶液，在混合溶液加入柠檬酸缓冲溶液，3~5分钟后加入HEPES缓冲溶液，离心洗去多余ssDNA即得。本发明还公开了基于免标记的荧光探针构建的FEN1酶活性检测方法及其在细胞成像中的应用。本发明不需要借助昂贵精密仪器检测，简化了检测方法，极大地降低了检测FEN 1酶的检测成本，本发明具有运行成本低、检测快速简便、选择性好、灵敏度高等优点。此外，所制备的荧光探针具有较好的生物相容性和低毒性特点，可以进入细胞，进行体内检测。
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公开(公告)号：CN111088039A
公开(公告)日：2020-05-01
申请号：CN201911333073.1
申请日：2019-12-20
申请人： 东南大学
摘要： 本发明公开了免标记的荧光探针及其制备方法和应用，所述免标记的荧光探针的制备方法如下：将金纳米粒子与ssDNA溶液混合后涡旋5~10秒得到混合溶液，在混合溶液加入柠檬酸缓冲溶液，3~5分钟后加入HEPES缓冲溶液，离心洗去多余ssDNA即得。本发明还公开了基于免标记的荧光探针构建的FEN1酶活性检测方法及其在细胞成像中的应用。本发明不需要借助昂贵精密仪器检测，简化了检测方法，极大地降低了检测FEN 1酶的检测成本，本发明具有运行成本低、检测快速简便、选择性好、灵敏度高等优点。此外，所制备的荧光探针具有较好的生物相容性和低毒性特点，可以进入细胞，进行体内检测。
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公开(公告)号：CN106350577B
公开(公告)日：2019-07-12
申请号：CN201610824309.1
申请日：2016-09-14
申请人： 东南大学
IPC分类号： C12Q1/48
摘要： 本发明公开了基于水溶性阳离子聚合物的荧光可视化定量检测端粒酶活性的方法，包括以下步骤：1）在缓冲溶液中加入端粒酶识别序列作为引物；2）端粒酶对引物进行扩增，形成的富G序列；3）在钾离子的作用下富G序列形成G‑四链体；4）加入水溶性阳离子聚合物发生荧光能量共振转移；5）利用紫外可见灯观察颜色变化，并用荧光分光光度计对溶液的荧光强度进行检测。本发明利用阳离子聚合物和G‑四链体上标记的荧光素FAM发生荧光能量共振转移，在紫外灯下溶液颜色由蓝色变为绿色，颜色变化明显，可对端粒酶活性进行半定量检测；用荧光分光光度计精确测量FAM荧光强度变化，实现对端粒酶活性的准确定量，方法灵敏度高。
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公开(公告)号：CN106841135B
公开(公告)日：2019-05-31
申请号：CN201710011874.0
申请日：2017-01-06
申请人： 东南大学
IPC分类号： G01N21/64
摘要： 本发明公开了一种通过荧光法同时检测多种miRNA浓度的方法，包括：miRNA的选择；制备荧光素标记的核酸探针；选择荧光供体；计算多种miRNA对应的荧光素的荧光串扰校正因子；获得校正后的多种miRNA对应的荧光素的荧光强度与miRNA浓度的对应关系式；检测待测miRNA溶液中多种miRNA对应的荧光素的荧光信号，用校正后的多种miRNA对应的荧光素的荧光强度与miRNA浓度的对应关系式计算得到miRNA的浓度。本发明利用单一波长激发实现多种miRNA的同时检测，简化了检测方法，有效降低了背景信号和荧光素信号之间的干扰，可准确测量溶液中任一miRNA的浓度，且成本低、快速、简便、敏感且特异性好。
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公开(公告)号：CN109342526A
公开(公告)日：2019-02-15
申请号：CN201811416718.3
申请日：2018-11-26
申请人： 东南大学
IPC分类号： G01N27/30 , G01N27/327
CPC分类号： G01N27/308 , G01N27/3276 , G01N27/3278
摘要： 本发明公开了一种基于β-环糊精主客体作用的电化学适体传感器检测黄曲霉毒素B1(AFB1)的方法，包括以下步骤：1)黄曲霉毒素B1特异性响应的双链DNA(Fc-dsDNA)的制备；2)AFB1与Fc-dsDNA之间的特异性反应；3)将上述Fc-dsDNA与AFB1的反应液滴加在BSA/pβ-CD/AuNPs/GC电极上，并利用示差脉冲(DPV)和交流阻抗(AC impedance)对反应体系进行检测；4)利用扫描电子显微镜对不同的电极修饰面进行表征。本发明先通过AFB1与适体之间的特异性识别使Fc-cDNA从Fc-dsDNA中脱离，然后利用β-环糊精的主客体相互作用和尺寸效应对释放的单链DNA(Fc-ssDNA)进行包覆形成络合物修饰在电极表面，从而引起玻碳电极表面电化学信号的变化。本发明具有运行成本低、检测快速、简便、敏感高、选择性好等优点。
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公开(公告)号：CN106442659B
公开(公告)日：2018-12-14
申请号：CN201610824784.9
申请日：2016-09-14
申请人： 东南大学
IPC分类号： G01N27/26
摘要： 本发明公开基于苯胺沉积的电化学传感电极定量检测8‑OhdG活性的方法，包括以下步骤：带有巯基的DNA四面体结构的制备；带有巯基的DNA四面体结构在金电极上的修饰得到顶端连接8‑OHdG适体的巯基的DNA四面体结构的电极；G‑四链体电极的形成；聚苯胺沉积的电化学传感电极；利用电化学方法对产生的聚苯胺的电流信号进行检测从而检测8‑OhdG的活性。本发明极大地提高了8‑OHdG的检测灵敏度。与传统的以8‑OHdG还原峰为信号的电化学检测方法相比，检测限降低2个数量级。本发明无需制备复杂材料以及标记DNA探针，可避免材料制备及标记DNA探针而导致检测成本高、操作烦琐，重现性差的缺陷。本发明具有成本低、快速、简便、灵敏度高的优点。
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公开(公告)号：CN108486222A
公开(公告)日：2018-09-04
申请号：CN201810227750.0
申请日：2018-03-20
申请人： 东南大学
IPC分类号： C12Q1/682
摘要： 本发明公开一种基于核酸染料TOTO-1对单链G序列荧光增强的检测端粒酶活性的方法。本方法步骤如下：1）细胞的培养以及端粒酶的提取得到裂解后的细胞溶液；2）将裂解后的细胞溶液加入端粒酶扩增缓冲溶液，对端粒酶引物进行扩增，得到重复的富G序列的产物溶液；3）加入TS primer的互补序列，杂交后，再加ExoⅢ酶切除双链，最后加TOTO-1，孵育，检测荧光光谱。本发明利用了TOTO对含G碱基DNA链的识别作用来检测端粒酶，简化了检测方法，避免了标记DNA探针而导致检测成本高、操作烦琐，重现性差的缺陷。本发明具有成本低、快速、简便、灵敏度高的优点。
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公开(公告)号：CN107643251A
公开(公告)日：2018-01-30
申请号：CN201710669001.9
申请日：2017-08-08
申请人： 东南大学
IPC分类号： G01N21/25
摘要： 本发明公开了一种金纳米棒探针比色法检测多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)的方法，包括以下步骤：1)激活双链DNA的选取与杂交；2)金纳米棒探针的合成；3)激活双链DNA，PARP-1，NAD+混合反应，进行多聚腺苷二磷酸核糖聚合物(PAR)的制备；4)金纳米棒探针和多聚腺苷二磷酸核糖聚合物(PAR)作用，并利用紫外–可见光谱仪观察对反应溶液进行检测；5)利用透射电镜和暗场光散射对团聚前后金棒溶液进行表征。本发明利用正电性的金纳米棒在负电性的PAR表面自组装后，溶液由深红棕色变为几乎无色，颜色变化明显，因此可利用比色法检测PARP-1。本发明具有运行成本低、检测快速、简便、敏感高、选择性好等优点。
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公开(公告)号：CN106442659A
公开(公告)日：2017-02-22
申请号：CN201610824784.9
申请日：2016-09-14
申请人： 东南大学
IPC分类号： G01N27/26
CPC分类号： G01N27/26
摘要： 本发明公开基于苯胺沉积的电化学传感电极定量检测8-OhdG活性的方法，包括以下步骤：带有巯基的DNA四面体结构的制备；带有巯基的DNA四面体结构在金电极上的修饰得到顶端连接8-OHdG适体的巯基的DNA四面体结构的电极；G-四链体电极的形成；聚苯胺沉积的电化学传感电极；利用电化学方法对产生的聚苯胺的电流信号进行检测从而检测8-OhdG的活性。本发明极大地提高了8-OHdG的检测灵敏度。与传统的以8-OHdG还原峰为信号的电化学检测方法相比，检测限降低2个数量级。本发明无需制备复杂材料以及标记DNA探针，可避免材料制备及标记DNA探针而导致检测成本高、操作烦琐，重现性差的缺陷。本发明具有成本低、快速、简便、灵敏度高的优点。
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公开(公告)号：CN103993083B
公开(公告)日：2016-01-06
申请号：CN201410220070.8
申请日：2014-05-22
申请人： 东南大学
摘要： 本发明公开一种基于限制性内切酶HpaⅡ和核酸外切酶Ⅲ的DNA甲基化及甲基化转移酶活性的检测方法。制备了无标记的DNA探针，该探针序列包含了限制性内切酶的切割位点和甲基化的CpG位点,通过该无标记的DNA探针与目标DNA杂交，用甲基化转移酶进行甲基化处理，再用限制性内切酶HpaⅡ的特异性切割以及作用于双链DNA的3'→5'外切酶活性的核酸外切酶Ⅲ作用，然后利用荧光信号分子噻唑橙对单双链DNA不同信号实现检测甲基化及甲基转移酶活性的目的。本发明无需制备复杂材料和标记DNA探针，可避免材料制备及标记DNA探针而导致检测成本高、操作烦琐，重现性差的缺陷。本发明具有成本低、快速、简便、灵敏度高的优点。
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