公开(公告)号：CN109652419A

公开(公告)日：2019-04-19

申请号：CN201811570132.2

申请日：2018-12-21

Applicant: 扬州大学

Inventor： 吴健 ,  王幼平 ,  林俐 ,  孙勤富 ,  刘东晓 ,  方玉洁 ,  蒋金金 ,  吴德伟

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/82 ,  C12N15/10 ,  A01H5/00 ,  C12Q1/6895

Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种受核盘菌诱导的油菜启动子pBnGH、鉴定方法和应用。从甘蓝型油菜（Brassica napus）中分离克隆并鉴定了一个菌核病病原菌核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum）诱导启动子。该启动子的核苷酸序列为序列表中SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。实验证明，该启动子调控的基因能对核盘菌侵染产生特异性的应答反应，但在油菜和拟南芥的叶片、茎秆、花蕾、角果、种子中表达量极低，仅在根中有一定的表达。此外该启动子不被激素处理和大多数非生物胁迫诱导，仅对高温产生一定的应答反应。利用pBnGH启动子调控抗性基因的表达，仅仅在核盘菌侵袭时才剧烈诱导抗性基因的表达，增强油菜对核盘菌的抵抗能力。

公开(公告)号：CN107604001A

公开(公告)日：2018-01-19

申请号：CN201710832330.0

申请日：2017-09-15

Applicant: 扬州大学

Inventor： 孙勤富 ,  王幼平 ,  吴健 ,  蒋金金 ,  林俐 ,  方玉洁

IPC: C12N15/82

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种基于真空渗入的甘蓝和甘蓝型油菜叶片瞬时表达的方法。该方法包括用农杆菌侵染液悬浮活化后的农杆菌；将甘蓝或甘蓝型油菜幼苗叶片切割成小块；将叶片小块置于农杆菌侵染液中，抽真空处理促进农杆菌对植物组织的渗入；将农杆菌侵染后的叶片小块暗培养的步骤。本发明结合叶片预处理和真空处理实现农杆菌渗入甘蓝或甘蓝型油菜叶片组织中从而实现农杆菌高效浸染甘蓝或甘蓝型油菜细胞，并且可以实现高效率的甘蓝和甘蓝型油菜中外源基因瞬时表达。

公开(公告)号：CN102433325A

公开(公告)日：2012-05-02

申请号：CN201210014004.6

申请日：2012-01-17

Applicant: 扬州大学

Inventor： 王幼平 ,  蒋金金 ,  王娟 ,  杜坤 ,  邵彦林

IPC: C12N15/10

Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种适于油菜种子的RNA提取方法，该方法将热硼酸盐提取缓冲液预热至65℃；再将油菜籽液氮速冻研磨成粉后加入预热的上述提取缓冲液，继续研磨成匀浆；孵育后用氯化钾沉淀蛋白，再经离心、除杂等步骤得到总RNA。本方法所提取油菜籽总RNA质量完好、没有明显降解现象，OD260/OD280和OD260/OD230均在2.0左右，样品中没有其它杂质如蛋白、盐离子的污染，产物获得率大于40µg/100mg，符合cDNA文库构建的要求。