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公开(公告)号：CN105602921A
公开(公告)日：2016-05-25
申请号：CN201610212888.4
申请日：2016-04-07
申请人： 中国水产科学研究院黄海水产研究所
CPC分类号： C12N9/2434 , C12Y302/01132
摘要： 本发明提供了一种壳聚糖酶EAG1突变体，其氨基酸序列为SEQ ID NO:1。本发明的该突变体与壳聚糖酶EAG1相比，具有更优良的热稳定性与更高的催化效率，对壳聚糖具有快速分解能力。通过对含有突变体基因的酵母工程菌的高效异源表达，可实现壳聚糖酶EAG1突变体的规模化制备。
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公开(公告)号：CN104304096B
公开(公告)日：2016-01-27
申请号：CN201410422481.5
申请日：2014-08-26
申请人： 中国水产科学研究院黄海水产研究所
IPC分类号： A01K61/00
CPC分类号： Y02A40/81
摘要： 本发明建立了牙鲆抗迟钝爱德华氏菌病优良品系选育方法，主要包括如下的步骤：迟钝爱德华氏菌感染牙鲆鱼苗及其抗病力测定方法、抗迟钝爱德华氏菌病群体筛选方法、抗迟钝爱德华氏菌病家系筛选方法以及抗迟钝爱德华氏菌病家系特异微卫星标记筛选方法等，筛选到抗病家系特异微卫星标记；建立了抗病家系后代抗病力和养殖成活率测试方法，创制了牙鲆抗迟钝爱德华氏菌病优良品系。采用本发明技术生产的牙鲆苗种具有抗迟钝爱德华氏菌病能力强、养殖成活率高、死亡率低、生长速度较快的特点，基本解决了牙鲆苗种夏季因感染迟钝爱德华氏菌而爆发腹水病引起大量死亡的问题，适合在全国沿海地区牙鲆养殖场推广应用。
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公开(公告)号：CN101591638A
公开(公告)日：2009-12-02
申请号：CN200910016926.9
申请日：2009-06-23
申请人： 中国水产科学研究院黄海水产研究所
IPC分类号： C12N5/06
摘要： 大菱鲆肾细胞系的构建方法，首先配制细胞培养液，以大菱鲆的肾脏组织为材料，漂洗剪碎后，用0.5％胰蛋白酶室温消化30分钟，采用200目尼龙纱网过滤收集细胞，将细胞以5－10×105个/瓶的量分装至25cm2培养瓶中，置于24℃培养。以后每隔4天半量更换细胞培养液，待原代细胞生长为单层时，用0.25％的胰蛋白酶消化细胞进行传代；8－10天传代1次，传至第8代时，细胞培养液中血清含量由20％减为10％，此时细胞系建立成功。利用这种方法获得的大菱鲆肾细胞系形态为成纤维样，可以连续传代40代以上，细胞系可以直接应用于病原特性研究、疫苗研制及功能基因研究；该构建方法适用于其他鱼类构建肾细胞系。
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公开(公告)号：CN101270389A
公开(公告)日：2008-09-24
申请号：CN200810015987.9
申请日：2008-05-09
申请人： 中国水产科学研究院黄海水产研究所
摘要： 一种半滑舌鳎雌性特异分子标记及其应用，包括筛选方法，含半滑舌鳎基因组DNA的提取，基因组DNA的AFLP分析和雌性特异分子标记的筛选；还包括半滑舌鳎雌性特异分子标记的克隆与序列，含雌性特异分子标记的回收，雌性特异分子标记的克隆和雌性特异分子标记的序列；再包括一种雌性特异分子标记的应用，应用于无损伤鉴别半滑舌鳎的遗传性别，即采集待测半滑舌鳎鱼基因组DNA，根据获得的3个半滑舌鳎雌性特异分子标记的序列，分别设计3对特异引物，采用其中任意1对雌性特异引物进行PCR扩增，就可以对半滑舌鳎鱼进行遗传性别鉴定。具有先进、高效、准确、可靠的特点，在半滑舌鳎单性苗种生产中具有重要应用价值，并在其它鱼类遗传性别鉴定和性别控制研究中也具有广阔应用前景。
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公开(公告)号：CN1321177C
公开(公告)日：2007-06-13
申请号：CN200510044628.2
申请日：2005-09-05
申请人： 中国水产科学研究院黄海水产研究所
IPC分类号： C12N5/06
摘要： 一种鱼类胚胎细胞分离与培养方法，其操作程序是：鱼类胚胎的收集；胚胎(囊胚-原肠后期)细胞分离；胚胎细胞的原代和传代培养；胚胎细胞特征的鉴定，包括形态学、增殖特性、染色体核型的鉴定。胚胎的消毒采用70%酒精浸泡灭菌法，细胞从胚胎中的分离采用撕裂法，胚胎细胞的分离与培养都在完全培养基中进行，细胞培养在普通培养箱中进行，培养温度为24℃，每周传代2-3次。以此方法培养的海水鱼类胚胎细胞具有细胞小、呈圆形或多角形、生长稳定、增殖快速、二倍体细胞比率高等特征。本发明技术操作简单，使用方便，可推广应用于几乎所有鱼类胚胎细胞的分离与培养。
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公开(公告)号：CN1769429A
公开(公告)日：2006-05-10
申请号：CN200510044736.X
申请日：2005-09-15
申请人： 中国水产科学研究院黄海水产研究所
摘要： 一种花鲈胚胎干细胞移植制备嵌合体的方法，其操作程序是：花鲈囊胚(约1000个细胞)作受体、以稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的花鲈胚胎干细胞(LJES1细胞)为供体，通过显微注射方法将20－50个供体细胞移植到受体囊胚中，无菌海水培养移植胚胎，孵化鱼苗用新鲜海水培养，在荧光显微镜下(激发波长488nm)观察到表达GFP的胚胎和鱼苗即为嵌合体。应用本方法制备的嵌合体其成功率、成活率和孵化率分别为58％、56％和79％，明显高于受体具有相同特性的金鲷的44％、43％和42％，充分证明本发明在技术上更适于海水鱼类细胞移植和嵌合体制备，具有更强的实用性。
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公开(公告)号：CN1766092A
公开(公告)日：2006-05-03
申请号：CN200510044628.2
申请日：2005-09-05
申请人： 中国水产科学研究院黄海水产研究所
IPC分类号： C12N5/06
摘要： 一种鱼类胚胎细胞分离与培养方法，其操作程序是：鱼类胚胎的收集；胚胎(囊胚－原肠后期)细胞分离；胚胎细胞的原代和传代培养；胚胎细胞特征的鉴定，包括形态学、增殖特性、染色体核型的鉴定。胚胎的消毒采用70％酒精浸泡灭菌法，细胞从胚胎中的分离采用撕裂法，胚胎细胞的分离与培养都在完全培养基中进行，细胞培养在普通培养箱中进行，培养温度为24℃，每周传代2－3次。以此方法培养的海水鱼类胚胎细胞具有细胞小、呈圆形或多角形、生长稳定、增殖快速、二倍体细胞比率高等特征。本发明技术操作简单，使用方便，可推广应用于几乎所有鱼类胚胎细胞的分离与培养。
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