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公开(公告)号：CN110387346B
公开(公告)日：2021-01-29
申请号：CN201910701830.X
申请日：2019-07-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了缺失21个编码胞外多糖合成基因的基因工程菌及其应用，属于基因工程和发酵工程领域。本发明采用CRISPR/Cas9敲除系统敲除大肠杆菌W3110基因组上负责胞外多糖合成和转运的21个基因得到突变菌WJW09，采用WJW09菌株为宿主菌，利用pBHR68异源表达PHB合成基因簇phaCAB，WJW09/pBHR68合成PHB可以达到细胞干重的57.2％，而W3110/pBHR68合成的PHB仅占细胞干重的1.5％。重组菌WJW09/pBHR68的PHB体积产量高达对照菌W3110/pBHR68(1.5％)的38倍。
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公开(公告)号：CN110387347A
公开(公告)日：2019-10-29
申请号：CN201910703084.8
申请日：2019-07-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一株大肠杆菌膜壁精简底盘菌株及其高产PHB的应用，属于基因工程和发酵工程领域。本发明敲除野生型大肠杆菌W3110基因组上脂多糖的核心糖基因簇gmhD-waaQ和O-抗原基因簇wbbL-rmlB，胞外多糖基因簇galF-wza，4型荚膜多糖合成基因簇yccC-ymcD，三个鞭毛基因簇flhE-motA、fliY-fliR、flgN-flgL，和一个菌毛基因簇fimB-fimH得到菌株WJW08，然后将PHB合成相关的基因转化到菌株中得到重组菌WJW08/pBHR68，在正常的发酵条件下该重组菌可以合成细胞干重81.9％的PHB，是野生对照菌W3110/pBHR68(1.5％)的54.6倍。
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公开(公告)号：CN110373435A
公开(公告)日：2019-10-25
申请号：CN201910701822.5
申请日：2019-07-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种通过敲除rfaD基因高效合成PHB的方法，属于基因工程和发酵工程领域。本发明敲除大肠杆菌基因组上rfaD基因后将合成PHB的酶的编码基因转化到菌株中发酵生产PHB。发现rfaD基因的敲除可以显著改善大肠杆菌W3110、DH5α和JM109合成PHB的能力，WJW00/pDXW-8-phaCAB的PHB体积产量较对照菌W3110/pDXW-8-phaCAB提高3.95和3.66倍；WJD00/pDXW-8-phaCAB细胞合成PHB占细胞干重比例较对照菌提高约80％，转化率提高约1.9倍；WJJ00/pDXW-8-phaCAB细胞合成PHB占细胞干重比例较对照菌提高约75％，转化率提高约1.8倍。
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公开(公告)号：CN105950517A
公开(公告)日：2016-09-21
申请号：CN201610515320.X
申请日：2016-06-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种谷氨酸棒杆菌及其应用，属于微生物领域。所述谷氨酸棒杆菌于2016年6月1日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2016303。该谷氨酸棒杆菌可在细胞内积累较多的丙酰辅酶A，较ATCC13869提高了15.8倍，可用于以丙酰辅酶A为底物的相关代谢产物的生产。当引入聚羟基脂肪酸酯合成基因后，该谷氨酸棒杆菌可以合成PHBV，但在ATCC13869中合成产物为PHB。该发明解决了外源添加丙酸盐或丙酸来生产PHBV的现状，实现了在谷氨酸棒杆菌中无外源添加丙酸或丙酸盐直接生产PHBV，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN113174393B
公开(公告)日：2023-09-12
申请号：CN202110468047.0
申请日：2021-04-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种改善大肠杆菌耐药性的方法及其应用，属于基因工程和发酵工程领域。本发明敲除大肠杆菌基因组上三个鞭毛基因簇flhE‑motA，fliY‑fliR和flgN‑flgL得到鞭毛精简菌株WJW010，敲除菌毛基因簇fimB‑fimH得到菌毛精简菌株WJW011。鞭毛或菌毛合成基因簇的敲除可以降低对头孢西丁的耐药性，WJW010和WJW011对头孢西丁的MIC分别是8mg/L、8mg/L，较野生对照菌W3110降低1倍；并且，敲除鞭毛基因簇或菌毛基因簇能够提升合成乙酰辅酶A和ATP水平；实验表明，WJW010和WJW011合成乙酰辅酶A和ATP水平较野生对照W3110提高。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN116162642A
公开(公告)日：2023-05-26
申请号：CN202310286663.3
申请日：2023-03-22
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高产L‑苏氨酸的大肠杆菌的构建及应用，属于基因工程和发酵工程领域。本发明在大肠杆菌TWF001基因组中敲除菌毛合成基因簇Ycb，Yad，Yde，Yeh，Yqi，Yra，Yfc，Type1，Yhc和Sfm，得到突变菌TWK021，TWK021菌株在发酵培养基中L‑苏氨酸产量为15.75g/L，比TWF001产量提高了32.4％，并在分批补料发酵中获得了62.7g/L的L‑苏氨酸产量。本发明构建了一株稳定的高产L‑苏氨酸的大肠杆菌，发酵过程中全程不需要抗生素维持质粒存在，提供了一种提高大肠杆菌中L‑苏氨酸产量的新策略。
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公开(公告)号：CN114606254A
公开(公告)日：2022-06-10
申请号：CN202210235371.2
申请日：2022-03-11
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种副溶血弧菌基因高效敲除质粒的构建方法，属于分子生物学和生物技术领域。本发明优化了敲除过程，引入Cre/loxP系统。在敲除同源臂之间加入了带有loxP位点的庆大霉素抗性片段，后该抗性片段通过Cre酶去除。第二次同源重组时加入庆大霉素，只有正确进行同源重组的菌株可以存活于10％蔗糖庆大抗性平板上，以此提高敲除菌株的筛选效率。再进行第二次结合转导，将带有cre基因的pOTC质粒导入副溶血弧菌。cre基因在细胞中表达Cre酶，识别loxP位点，并去除loxL与loxR之间的基因片段，即去除庆大抗性片段，在含有10％蔗糖的试管中去除pOTC质粒，本发明的方法提高正确菌株的筛选效率。
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公开(公告)号：CN110373438B
公开(公告)日：2021-05-04
申请号：CN201910703126.8
申请日：2019-07-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种提高γ‑氨基丁酸产量的方法，属于基因工程和发酵工程领域。本发明敲除大肠杆菌基因组上ADP‑L‑甘油‑D‑甘露‑庚糖‑6‑差向异构酶RfaD基因得到重组菌WJW00后，利用WJW00进行发酵生产GABA，GABA产量达到0.6415g/L，是野生菌W3110(0.0135g/L)的47.52倍；且重组菌WJW00发酵产物中，副产物有机酸的含量均降低，如发酵24h时，丙酮酸、乙酸、乳酸的含量相对于野生菌W3110分别降低65.1％、38.9％、56.6％。本发明提供了一种新的提高GABA合成的方法，对于进一步提高GABA的合成具有十分重大的意义。
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公开(公告)号：CN110317767B
公开(公告)日：2021-01-29
申请号：CN201910599466.0
申请日：2019-07-04
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高产苏氨酸的基因工程菌及其应用方法，属于基因工程和发酵工程领域。所述基因工程菌为TWF001/pFW01‑phaCAB，在三氯生表达质粒pFW01上过表达了phaCAB，可以在胞外合成苏氨酸，胞内合成PHB。本发明构建的菌株苏氨酸合成量大大提高，在摇瓶发酵水平产量为17.0g/L，在3‑L罐发酵水平，合成苏氨酸产量为96.4g/L，在10L罐发酵水平，合成苏氨酸产量为133.5g/L。所述基因工程菌为TWF001/pFW01‑phaCAB生长状况良好，未引入外源抗性基因序列，更有利于大规模工业化生产。
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公开(公告)号：CN110669709A
公开(公告)日：2020-01-10
申请号：CN201910701811.7
申请日：2019-07-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种通过敲除鞭毛和菌毛基因高效合成PHB的方法，属于基因工程和发酵工程领域。本发明敲除大肠杆菌基因组上三个鞭毛基因簇flhE-motA，fliY-fliR和flgN-flgL得到鞭毛精简菌株WJW010，敲除菌毛基因簇fimB-fimH得到菌毛精简菌株WJW011。随后将PHB合成的三个基因转化到菌株WJW010和WJW011中，得到重组菌WJW010/pBHR68和WJW011/pBHR68，在正常的发酵条件下即可以合成细胞干重19.2％、2.8％的PHB，PHB体积产量是野生对照菌W3110/pBHR68(2％)的9.6倍和1.4倍。
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