一种番鸭细小病毒VP3基因重组鸡痘病毒转移载体及其构建方法

    公开(公告)号:CN105132462A

    公开(公告)日:2015-12-09

    申请号:CN201510570155.3

    申请日:2015-09-09

    IPC分类号: C12N15/863

    摘要: 本发明公开了一种番鸭细小病毒VP3基因重组鸡痘病毒转移载体及其构建方法。以鸡痘病毒基因组为模板扩增TK基因的同源重组臂TKL、TKR,并将其连接成带有多克隆位点MCS的TK片段,再连入骨架质粒,得质粒pTK;合成反向串联表达盒S,并将其插入质粒pTK中,得质粒pTKS;在早期启动子P7.5后的MCS1处插入VP3基因,晚期启动子P11后的MCS2处插入EGFP BGH pA,即得目的转移载体pTKS-VP3-EGFP。将pTKS-VP3-EGFP转染鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞后,经RT-PCR和荧光蛋白检测VP3能够正常表达。本发明为进一步研制安全、高效的MDPV重组鸡痘病毒疫苗奠定了基础。

    一种快速提取鸭疫里默氏杆菌基因组DNA的方法及试剂盒

    公开(公告)号:CN103614370A

    公开(公告)日:2014-03-05

    申请号:CN201310561323.3

    申请日:2013-11-12

    IPC分类号: C12N15/10 C12R1/01

    摘要: 本发明公开了一种快速提取鸭疫里默氏杆菌基因组DNA的方法及试剂盒。该方法包括如下步骤:1)菌体裂解,2)沉淀菌体蛋白,3)去除菌体蛋白,4)沉淀基因组DNA,5)去离子,6)溶解DNA。其中步骤1)所用到的菌体裂解缓冲液含有:38~42mMTris-acetatepH7.8,18~22mMsodium-acetate,0.8~1.2mMEDTA,0.8~1.2%SDS。本发明方法提取获得的鸭疫里默氏杆菌基因组DNA,不仅提取效率高,而且基因组DNA的纯度高,为后续分子生物学的研究奠定了坚实基础,且操作简单可行,实用性强。