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公开(公告)号：CN114366717B
公开(公告)日：2023-06-09
申请号：CN202210027906.7
申请日：2022-01-11
申请人： 四川农业大学 , 成都禾正众邦动物药业有限公司
IPC分类号： A61K9/16 , A61K9/14 , A61K47/36 , A61K47/30 , A61K47/32 , A61K47/38 , A61K47/10 , A61K31/353 , A61P31/04 , B82Y5/00 , B82Y40/00
摘要： 本发明提供了一种基于EGCG纳米粒的肠溶固体分散体颗粒、制备方法及其应用，属于细菌感染预防技术领域。本发明提供的基于EGCG纳米粒的肠溶固体分散体颗粒中EGCG的平均含量为67.2％，能够很好地应用于对抗副猪嗜血杆菌、鸭疫里默氏杆菌和巴氏杆菌的感染，对三种细菌性疾病的治愈率均达到了80％以上。同时，本发明提供的肠溶固体分散体颗粒在胃液环境中具有显著的稳定性，但是在小肠环境中则能够迅速释放出纳米EGCG，因此本发明的肠溶固体分散体不但增强了EGCG的稳定性，具有很好的缓释性能，而且还提高了EGCG的生物利用度。
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公开(公告)号：CN111690778B
公开(公告)日：2022-06-03
申请号：CN202010686391.2
申请日：2020-07-16
申请人： 四川农业大学
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12N15/11 , C12R1/93
摘要： 本发明公开了一种APPV病毒的PCR引物、探针及其鉴别方法，鉴别APPV病毒的微滴数字PCR反应体系为：ddPCRTM Supermix for Probes(no dUTP)、具有如SEQ.ID NO1所示核苷酸序列的上游引物、具有如SEQ.ID NO2所示核苷酸序列的下游引物、具有如SEQ.ID NO3所示核苷酸序列的探针、待检测样品的cDNA和水。本发明的微滴式数字PCR方法能够快速检测，具有良好的特异性，其能检出的最低检测限为0.15copies/μL，灵敏度高，而且组内组间重复试验变异系数均小于6％，具有良好的重复性和稳定性。
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公开(公告)号：CN114366717A
公开(公告)日：2022-04-19
申请号：CN202210027906.7
申请日：2022-01-11
申请人： 四川农业大学 , 成都禾正众邦动物药业有限公司
IPC分类号： A61K9/16 , A61K9/14 , A61K47/36 , A61K47/30 , A61K47/32 , A61K47/38 , A61K47/10 , A61K31/353 , A61P31/04 , B82Y5/00 , B82Y40/00
摘要： 本发明提供了一种基于EGCG纳米粒的肠溶固体分散体颗粒、制备方法及其应用，属于细菌感染预防技术领域。本发明提供的基于EGCG纳米粒的肠溶固体分散体颗粒中EGCG的平均含量为67.2％，能够很好地应用于对抗副猪嗜血杆菌、鸭疫里默氏杆菌和巴氏杆菌的感染，对三种细菌性疾病的治愈率均达到了80％以上。同时，本发明提供的肠溶固体分散体颗粒在胃液环境中具有显著的稳定性，但是在小肠环境中则能够迅速释放出纳米EGCG，因此本发明的肠溶固体分散体不但增强了EGCG的稳定性，具有很好的缓释性能，而且还提高了EGCG的生物利用度。
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公开(公告)号：CN113215177A
公开(公告)日：2021-08-06
申请号：CN202110473233.3
申请日：2021-04-29
申请人： 四川农业大学
摘要： 本发明属于生物医药技术领域，公开了一种猪胸膜放线杆菌基因、蛋白的原核表达和应用，以App7型菌株基因组为模板扩增出AdhE的全基因序列；成功构建pET‑32a(+)‑rAdhE原核表达载体，实现其在大肠杆菌BL21中的可溶性诱导表达，融合蛋白大小为110kDa。本发明通过ELISA检测证明原核表达的rAdhE融合蛋白能刺激小鼠产生高水平特异性抗体，具有较好的免疫原性；rAdhE免疫小鼠后能够抵御APP7型的致死性攻毒和70％的APP1型的攻读保护，减轻小鼠体内急性炎症反应。
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公开(公告)号：CN111733289A
公开(公告)日：2020-10-02
申请号：CN202010686380.4
申请日：2020-07-16
申请人： 四川农业大学
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12N15/11
摘要： 本发明公开了一种用于检测APPV、CSFV、PCV3和PTV1的引物组、探针及方法，检测APPV的引物组包含：具有如SEQ.ID NO1、2所示核苷酸序列的上、下游引物；检测CSFV的引物组包含：具有如SEQ.ID NO4、5所示核苷酸序列的上、下游引物；检测PCV3的引物组包含：具有如SEQ.ID NO7、8所示核苷酸序列的上、下游引物；检测PTV1的引物组包含：具有如SEQ.ID NO10、11所示核苷酸序列的上、下游引物。本发明的方法能够同时对APPV、CSFV、PCV3和PTV1四种病毒进行检测，而且具有良好的特异性、灵敏性、重复性和稳定性。
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公开(公告)号：CN111471657A
公开(公告)日：2020-07-31
申请号：CN202010322977.0
申请日：2020-04-22
申请人： 四川农业大学
摘要： 本发明公开了生物医药领域的一种表达ASFV P30蛋白的PRV gE/gI双基因缺失株的构建方法，具体包括以下步骤，S1：试剂准备；S2：克隆质粒的制备；S3：构建PRV真核转移质粒pEGFP-CP204L；S4：PRV和pEGFP-CP204L质粒DNA的共转染；合成P30蛋白基因(CP204L)片段，构建转移质粒pEGFP-CP204L，利用经典的同源重组方式将ASFV CP204L基因插入PRV基因组替换gI和gE毒力基因，构建共表达P30蛋白的重组伪狂犬病毒株rXJ gE/gI-CP204L可用于预防ASFV和PRV感染；克隆质粒制备简单，成本较低，适用于产业化生产。
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公开(公告)号：CN109529032A
公开(公告)日：2019-03-29
申请号：CN201811472454.3
申请日：2018-12-04
申请人： 四川农业大学
IPC分类号： A61K39/245 , A61P31/22 , C12N15/85 , C12N15/38
摘要： 本发明涉及疫苗技术领域，具体涉及一种伪狂犬病毒囊膜糖蛋白gD基因mRNA疫苗，采用如下步骤制备：步骤1：构建PRV-gD基因mRNA克隆质粒和真核质粒；步骤2：伪狂犬病毒增殖与细胞培养；步骤3：抽提伪狂犬病毒DNA；步骤4：设计特异性引物：步骤5：PCR扩增伪狂犬病毒囊膜糖蛋白gD基因；步骤6：回收后目的片段与pMD19-T载体连接；步骤7：DH5α大肠杆菌感受态细胞的制备以及连接产物的转化；其构建了伪狂犬病毒囊膜糖蛋白gD基因真核表达载体PVAX-gD，可以刺激机体产生免疫反应并产生特异性抗体和中和抗体，与空白对照有显著的差异；攻毒保护试验表明，真核表达载体具有良好的免疫原性。
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公开(公告)号：CN103882049A
公开(公告)日：2014-06-25
申请号：CN201410124019.7
申请日：2014-03-28
申请人： 四川农业大学
摘要： 本发明提出了一种猪NF-κappaBC-Rel亚基的真核表达载体的构建，其构建方法为：首先，根据C-Rel基因，设计了一对特异性引物P1、P2，用重组PCR的方法扩增出目的基因，使其两段分别带上EcoRⅠ和XhoⅠ的酶切位点，把目的片段和载体双酶切后用SolutionI进行连接反应，再把重组质粒转化入DH5a大肠杆菌，建立PMD19-T-C-Rel重组质粒。其次，把重组质粒和pcDNA3.1(+)载体双酶切后用SolutionI进行连接反应，再把重组质粒转化入DH5a大肠杆菌最后，分别采用了PCR法，双酶切法和测序法三种方法进行筛选和鉴定阳性菌落。测序结果显示重组质粒序列与GenBank中的目的片段序列一致。证明目的基因已经插入pcDNA3.1(+)载体，重组质粒构建成功。
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公开(公告)号：CN102925586A
公开(公告)日：2013-02-13
申请号：CN201210271607.4
申请日：2012-08-02
申请人： 四川农业大学 , 四川川娇生态猪业股份有限公司
摘要： 本发明公开了一种用于检测猪Kobu病毒的检测试剂盒，检测50个样品的试剂盒组成如下：试剂A：TRIZOL 20ml、氯仿5ml、异丙醇12.5ml、75％乙醇10ml、RNasa-free水1ml；试剂B：5×PrimeScript Buffer 100μl、PrimeScript RT Enzyme Mix I 25μl、Oligo dT Primer 25μl、Random 6 mers 100μl、RNase Free dH2O 250μl；试剂C：上游引物P1 25μl、下游引物P2 25μl、SYBR Green I染料500μl、ddH2O 160μl；上游引物P1：5’-GGACCCAGACACTTACGAACA-3’；下游引物P2：5’-TCGGACCAGAATGGAAAGCA-3’。利用本试剂盒进行实时荧光定量PCR扩增曲线呈现出良好的S型，只出现扩增产物特异性的单个峰，产物的Tm值都在78-79℃之间，说明没有引物二聚体及非特异性扩增产物出现；检测的灵敏度可达10拷贝/微升，且具有很好的重复性。
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