公开(公告)号：CN106957910B

公开(公告)日：2020-11-20

申请号：CN201710096306.5

申请日：2017-02-22

申请人： 中国农业大学

发明人： 孙东晓 ,  韩博 ,  梁伟俊

IPC分类号： C12Q1/6888 ,  C12N15/11

摘要： 本发明公开了一种基于CDKN1A基因鉴定奶牛产奶性状的方法及其应用。本发明的鉴定奶牛产奶性状的方法为检测牛基因组23号染色体上第10565335位脱氧核糖核苷酸的基因型的物质。通过试验证明：本发明的方法简便、快速、灵敏，结果可靠、稳定、准确，并可用于辅助鉴定具有优良产奶性状的牛群体，适合实验室大群体规模检测的需要。不仅可对待选牛进行早期筛选，而且降低了育种花费，能有效提高实际生产中的牛的产奶量，在牛的育种工作中将发挥巨大作用。

公开(公告)号：CN105838821B

公开(公告)日：2019-12-06

申请号：CN201610394658.4

申请日：2016-06-06

申请人： 中国农业大学 ,  北京市畜牧总站

发明人： 张毅 ,  劳兰兰 ,  肖炜 ,  俞英 ,  唐韶青 ,  刘林 ,  王雅春 ,  孙东晓 ,  张胜利

IPC分类号： C12Q1/6888 ,  C12N15/11

摘要： 本发明提供了一种检测牛APAF1基因隐性致死突变的方法，涉及分子生物学领域，本发明方法基于焦磷酸测序技术，采用一对扩增引物、一条通用引物和一条测序引物，其核苷酸序列如SEQ ID No.1、2、3、4所示，对牛5号染色体63150400bp位点的单核苷酸多态性进行分析，结果发现牛APAF1基因野生型纯合子在C碱基处有峰，T碱基处无峰；而致死突变携带者在C碱基与T碱基处均有峰。本发明提供的方法操作简单，灵敏度高，准确性强，通量高，检测成本低，可快速检测APAF1基因隐性致死突变携带者的个体，在牛的育种过程中具有重要应用价值。

公开(公告)号：CN106957910A

公开(公告)日：2017-07-18

申请号：CN201710096306.5

申请日：2017-02-22

申请人： 中国农业大学

发明人： 孙东晓 ,  韩博 ,  梁伟俊

IPC分类号： C12Q1/68 ,  C12N15/11

摘要： 本发明公开了一种基于CDKN1A基因鉴定奶牛产奶性状的方法及其应用。本发明的鉴定奶牛产奶性状的方法为检测牛基因组23号染色体上第10565335位脱氧核糖核苷酸的基因型的物质。通过试验证明：本发明的方法简便、快速、灵敏，结果可靠、稳定、准确，并可用于辅助鉴定具有优良产奶性状的牛群体，适合实验室大群体规模检测的需要。不仅可对待选牛进行早期筛选，而且降低了育种花费，能有效提高实际生产中的牛的产奶量，在牛的育种工作中将发挥巨大作用。

公开(公告)号：CN106011250A

公开(公告)日：2016-10-12

申请号：CN201610393611.6

申请日：2016-06-06

申请人： 中国农业大学 ,  北京市畜牧总站

发明人： 张毅 ,  劳兰兰 ,  肖炜 ,  俞英 ,  唐韶青 ,  刘林 ,  王雅春 ,  孙东晓 ,  张胜利

IPC分类号： C12Q1/68 ,  C12N15/11

摘要： 本发明提供了一种检测牛SMC2基因隐性致死突变的方法，涉及分子生物学领域，本发明方法基于焦磷酸测序技术，采用一对引物、一条通用引物和一条测序引物，核苷酸序列如SEQ ID No.1、2、3、4所示，对牛8号染色体95410507bp位点的单核苷酸多态性进行分析，结果发现野生型纯合子在突变位点处为T/T基因型，焦磷酸测序结果图显示T碱基与C碱基的峰高比例为3:1；而致死突变携带者峰图在突变位点处为T/C基因型，焦磷酸测序结果图显示T碱基与C碱基的峰高比例为5:3。本发明提供的方法操作简单，灵敏度高，准确性强，通量高，检测成本低，在牛的保种、育种过程中具有重要应用价值。

公开(公告)号：CN104293787A

公开(公告)日：2015-01-21

申请号：CN201410474752.1

申请日：2014-09-17

申请人： 中国农业大学

发明人： 孙东晓 ,  谢岩

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/867 ,  C12N7/01 ,  A61K48/00 ,  C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  A61P35/00

摘要： 本发明公开了一种抑制奶牛EEF1D基因表达的siRNA及其应用,该siRNA能有效降低奶牛EEF1D基因的表达量。本发明公开一种siRNA分子，由SEQ ID No.7所示的正义链和SEQ ID No.8所示的反义链退火而成。利用本发明公开的siRNA构建的shRNA慢病毒表达载体，可进一步获得高滴度的慢病毒颗粒，可用于EEF1D基因对产奶性状和其他基因的影响的研究。

公开(公告)号：CN104232632A

公开(公告)日：2014-12-24

申请号：CN201410471772.3

申请日：2014-09-16

申请人： 中国农业大学

发明人： 孙东晓 ,  阿里姆 ,  范翌鹏 ,  谢岩 ,  王鹏 ,  张胜利 ,  张毅

IPC分类号： C12N15/11 ,  C12Q1/68

摘要： 本发明公开了一种分子标记在检测奶牛产奶性状中的应用。本发明公开一种引物，由SEQ ID No.3、SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示的DNA分子组成。本发明公开的分子标记可以应用于检测奶牛的产奶性状，在奶牛的分子育种中具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN102533998B

公开(公告)日：2013-06-26

申请号：CN201210001195.2

申请日：2012-01-04

申请人： 中国农业大学

发明人： 王雅春 ,  焦士会 ,  初芹 ,  俞英 ,  张胜利 ,  孙东晓 ,  张毅 ,  张沅

IPC分类号： C12Q1/68 ,  C12N15/11

摘要： 本发明涉及一种西门塔尔牛蜘蛛腿综合征致病位点PCR-RFLP检测用引物，其核苷酸序列如下：5’-ATGAAGGGACAGAGTGGTCGT-3；5’-CGTGGGTCAGTTGGTCAGAGT-3’。本发明利用PCR-RFLP技术，对西门塔尔牛AS致病位点进行分型的试剂盒结果稳定，成本低，准确可靠，对西门塔尔牛AS致病位点可以进行准确的分型。

公开(公告)号：CN102296062B

公开(公告)日：2012-08-22

申请号：CN201110251216.1

申请日：2011-08-29

申请人： 中国农业大学

发明人： 孙东晓 ,  谢岩 ,  范学华 ,  刘锐 ,  初芹 ,  张毅 ,  张沅 ,  张胜利

IPC分类号： C12N15/10

摘要： 本发明提供了一种公牛冻精基因组DNA的提取方法，其包括公牛精子的清洗、精子的裂解和消化以及基因组DNA的纯化步骤，本发明通过改进消化裂解液成分和配比，确定适宜的消化时间，提高了公牛精子DNA的消化产率；同时摒弃原有的有机溶剂抽提的纯化方法，采用比较简单的高盐法进行DNA纯化，使用的试剂易于配制，成本低，能有效去除杂质，获得产率高、质量好的冻精基因组，适合冻精基因组DNA的高效和批量获取。

公开(公告)号：CN101984077B

公开(公告)日：2012-08-15

申请号：CN201010567681.1

申请日：2010-11-25

申请人： 中国农业大学

发明人： 王雅春 ,  李东 ,  俞英 ,  张毅 ,  孙东晓 ,  张沅

IPC分类号： C12Q1/68 ,  G01N27/62

摘要： 本发明公开了用于荷斯坦牛群体的亲子鉴定SNP标记组合，一种含28个SNP标记，其中所述28个SNP标记的上游引物的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.23～50所示；下游引物的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.73～100所示；单碱基延伸引物的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.123～150所示；一种含50个SNP标记，其中所述50个SNP标记的上游引物的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1～50所示；下游引物的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.51～100所示；单碱基延伸引物的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.101～150所示。本发明提供的SNP标记组合用于荷斯坦牛群，结果准确，优选利用飞行质谱方法，可快速、高通量、简便的检测SNP标记多态，从而推断牛群的亲子关系。

公开(公告)号：CN102586464A

公开(公告)日：2012-07-18

申请号：CN201210076915.1

申请日：2012-03-21

申请人： 中国农业大学

发明人： 王雅春 ,  初芹 ,  焦士会 ,  俞英 ,  张胜利 ,  孙东晓 ,  张毅 ,  张沅

IPC分类号： C12Q1/68 ,  C12N15/11

摘要： 本发明涉及一种褐牛蜘蛛腿综合征致病位点PCR检测用引物，其核苷酸序列如下：5’-CTCAAGAGTCACCACGCAGAT-3’，5’-ATGGAGGGTGCCTTGTCGTC-3’。本发明还涉及PCR检测试剂盒及其检测方法和应用。本发明褐牛蜘蛛腿综合征致病位点PCR检测用引物及其试剂盒，检测结果稳定，成本低，准确可靠，可实现高通量检测，对褐牛AS致病位点可以进行准确的分型，能及时发现褐牛蜘蛛腿综合征携带者个体。