一种新暗色柱节孢菌基因敲除的方法及其应用

    公开(公告)号:CN117286154A

    公开(公告)日:2023-12-26

    申请号:CN202311566870.0

    申请日:2023-11-23

    发明人: 汤华 王猛

    摘要: 本发明提供了新暗色柱节孢菌基因敲除的方法,包括:(1)设计引物,克隆待敲除基因上游同源臂片段和下游同源臂片段;(2)设计带有待敲除基因同源臂接头的引物,克隆HPH‑GFP片段;(3)连接上游同源臂、带有接头的HPH‑GFP和下游同源臂,得到融合片段;(4)以步骤(3)中融合片段为模版,以步骤(1)中上游同源臂的上游引物、下游同源臂的下游引物进行PCR扩增,获得线性敲除载体;(5)将融合DNA片段转化新暗色柱节孢菌的原生质体感受态;(6)将转化后的新暗色柱节孢菌的原生质体加入培养基中培养,检测突变体,得到敲除目标基因的菌株。解决了现有方法基因敲除不成功的问题。为该菌基因功能等研究提供了新思路。

    提高昆虫生防真菌罗伯茨绿僵菌生长、产孢能力和提高毒力的方法

    公开(公告)号:CN117187085A

    公开(公告)日:2023-12-08

    申请号:CN202311047123.6

    申请日:2021-09-18

    申请人: 西南大学

    摘要: 本发明涉及一种提高生防真菌白僵菌、绿僵菌毒力或生防效果的基因、表达载体以及利用其获得的菌株、以获得菌株为活性成分的真菌杀虫剂。利用超量表达球孢白僵菌β‑葡聚糖酶基因编码的BbEng1,获得球孢白僵菌(Beauveria bassiana)、罗伯茨绿僵菌(Metarhizium robertsii)和蝗绿僵菌(M.acridum)的工程菌株,以及超量表达罗伯茨绿僵菌和蝗绿僵菌自身的同源基因MrEng1和MaEng1的工程菌株,所述球孢白僵菌、罗伯茨绿僵菌和蝗绿僵菌的工程菌株具有促进生长、提高产孢能力和毒力的功能。

    一种嗜热内切纤维素酶突变体及制备方法

    公开(公告)号:CN116970591B

    公开(公告)日:2023-12-05

    申请号:CN202311206014.4

    申请日:2023-09-19

    发明人: 吴信 高乐 张兆昆

    摘要: 本发明属于生物技术和微生物领域,具体涉及一种嗜热内切纤维素酶突变体及其制备方法。本发明通过酶蛋白理性改造新策略,借助机器学习和新型B因子分析的交叉策略,在嗜热内切纤维素酶发掘嗜热内切纤维素酶高度保守序列中的潜在突变位点,实现内切纤维素酶活性达到5800 IU/Ml,比改造前酶蛋白相比提升85.2%。本发明通过改造获得嗜热内切纤维素酶突变体,通过里氏木霉菌制备,表明大大提升了酶活力和热稳定性,具有较大应用价值。

    高活性的纤维素酶突变体及其组合物

    公开(公告)号:CN117050977A

    公开(公告)日:2023-11-14

    申请号:CN202210327230.3

    申请日:2022-03-30

    摘要: 本发明属于酶制剂领域,公开了一种高活性的纤维素酶变体,以及编码所述纤维素酶变体的多核苷酸,其中所述纤维素酶变体具有内切葡聚糖酶活性。本文还公开了组合物,所述组合物包含所述纤维素酶变体;载体和/或宿主细胞,所述载体和/或宿主细胞包含编码所述纤维素酶变体的多核苷酸;和方法,所述方法用于制备和/或使用所述纤维素酶变体和/或含有所述纤维素酶变体的组合物。本发明的纤维素酶突变体,在毕赤酵母中表达时,表达量及酶活显著高于野生型stce1,在里氏木霉中表达时,比活力比野生型提高了43.9%。本发明的纤维素酶变体酶活性得到显著提高,在实际生产中可以大幅降低纤维素酶的生产及应用成本,将会加快该酶在纺织洗涤领域中的广泛应用,市场前景广阔,具有重要的经济价值。

    提高米曲霉曲酸产量的基因Aokap3、方法及应用

    公开(公告)号:CN117025638A

    公开(公告)日:2023-11-10

    申请号:CN202310895514.7

    申请日:2023-07-20

    摘要: 本发明提供了提高米曲霉曲酸产量的基因Aokap3、方法及应用,Aokap3基因是一个提高米曲霉曲酸含量的新基因,通过破坏Aokap3基因编码蛋白的生物学功能能够显著提高米曲霉曲酸产量。本发明发现米曲霉Aokap3基因中以第390位至第409位的核苷酸序列作为靶序列,能够高效实现Aokap3基因的定点敲除,并且在如SEQ ID NO.2所示序列的第390位至第409位发生插入或缺失均会导致Aokap3基因的编码蛋白被破坏,提高米曲霉曲酸产量,经实验证明通过敲除Aokap3基因可制备高产曲酸的工程菌株,在曲酸的生产中具有十分重要的应用价值。

    一种asperpyridone A的高效生物合成方法

    公开(公告)号:CN116949084A

    公开(公告)日:2023-10-27

    申请号:CN202310824267.1

    申请日:2023-07-06

    申请人: 浙江大学

    摘要: 本发明公开了一种asperpyridone A的高效生物合成方法,利用农杆菌介导的转染构建大团囊虫草中的转化体系,该生物合成方法高效,方便,包括:将途径特异性调控因子topC基因片段,得到过表达质粒,将表达质粒利用电转化转入根癌农杆菌EHA105;接种于相应液体培养基避光振荡培养,取培养液,然后再避光振荡培养,得到重组农杆菌EHA105菌液;取重组农杆菌EHA105菌液和大团囊虫草菌分生孢子悬浮液混合,避光共培养,得到共培养混合菌体;得到OE::topC大团囊虫草转化子,液体发酵培养,发酵液经分离得到化合物asperpyridone A。

    一种降低L-苹果酸发酵过程中副产物琥珀酸的基因工程菌株、方法及应用

    公开(公告)号:CN116925933A

    公开(公告)日:2023-10-24

    申请号:CN202311009526.1

    申请日:2023-08-11

    发明人: 刘浩 白春芳 刘蛟

    摘要: 本发明属于生物工程技术领域,公开了一株降低L‑苹果酸发酵过程中副产物琥珀酸的黑曲霉工程菌株,所述黑曲霉工程菌株是敲除了产L‑苹果酸的黑曲霉菌株中特定基因ctp6的黑曲霉工程菌株。本发明克服了现有技术中的不足,现有的利用黑曲霉发酵生产苹果酸的过程中,副产物琥珀酸会伴随着苹果酸的产生而积累,造成后续苹果酸纯化工艺成本的提高,本发明提供了一种ctp6基因敲除的黑曲霉工程菌株,和一种大大减少黑曲霉发酵过程中副产物琥珀酸的方法。本发明显著地减少了黑曲霉发酵生产苹果酸过程中积累的副产物琥珀酸,减少了下游分离纯化苹果酸过程中的成本,为工业化发酵生产苹果酸提供了优良菌株。