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公开(公告)号：CN106636035A
公开(公告)日：2017-05-10
申请号：CN201610711425.2
申请日：2016-08-23
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明公开了一种灰略红链霉菌果胶酯酶及其编码基因和应用。该果胶酯酶基因从灰略红链霉菌(Streptomyces griseorubens)克隆得到，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1或其密码子优化后的SEQ ID NO.2所示，上述编码的果胶酯酶，其氨基酸序列为SEQ ID NO.3，以及该果胶酯酶及其编码基因在降解果胶中的应用。本发明通过对目的蛋白添加可溶性标签和目的蛋白的周外空间表达，保证了蛋白生物活性的同时便于后续蛋白的纯化。该酶是一种碱性、耐高温的果胶水解酶，该酶对多种金属离子及酶活性抑制剂均有很强的耐受能力，因此在实际的生产和应用中具有重要的意义。
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公开(公告)号：CN104232558A
公开(公告)日：2014-12-24
申请号：CN201410462541.6
申请日：2014-09-12
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 一种基因工程领域的基于外切葡聚糖酶的工程菌及其实现方法，以灰略红链霉菌基因组DNA为模板，与含有酶切位点和谷胱甘肽标签的引物进行PCR扩增得到编码外切葡聚糖酶的核苷酸序列；然后将扩增得到的基因序列连接到表达载体，再将获得的连接产物转入大肠杆菌表达菌株内，获得外切葡聚糖酶过表达重组菌株。本发明通过构建外源表达载体，优化蛋白诱导表达的条件和融合标签等方法，实现了外切葡聚糖酶的胞外过表达。
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公开(公告)号：CN104232554A
公开(公告)日：2014-12-24
申请号：CN201410462373.0
申请日：2014-09-12
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 一种基因工程领域的木糖苷酶的工程菌，以灰略红链霉菌基因组DNA为模板，与含有酶切位点和聚组氨酸标签的引物进行PCR扩增得到编码木糖苷酶的核苷酸序列；然后将扩增得到的基因序列连接到表达载体，再将获得的连接产物转入大肠杆菌表达菌株内，获得木糖苷酶过表达重组菌株。本发明针对现有技术存在的由于木糖苷酶在生物体内多为胞内酶且表达量较低导致的应用范围和效果严重受限等不足，应用基因工程手段实现其体外的大量表达合成，此外本发明通过在表达重组蛋白C端添加聚组氨酸标签的方法，提高蛋白活性的同时也保证了纯化后木糖苷酶的纯度；此外，本发明通过载体信号肽实现了目的蛋白的周质空间表达，提高了木糖苷酶的活性。
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公开(公告)号：CN104152392A
公开(公告)日：2014-11-19
申请号：CN201410374667.8
申请日：2014-07-31
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域的半纤维素酶的工程菌及其实现方法，以灰略红链霉菌基因组DNA经过全基因合成构建得到的pUC57‐XL载体为模板，与含有酶切位点的引物进行PCR扩增并对应分别得到编码木聚糖酶的核苷酸序列XL和编码木糖苷酶的核苷酸序列XO；然后将扩增得到的基因序列依次连接到共表达载体pETDuet‐1，最终重组共表达载体pETDuet‐XL‐XO；之后将该重组共表达载体转化到大肠杆菌表达菌株内，获得转基因共表达菌株。本发明能够应用基因工程手段实现木聚糖酶和木糖苷酶体外的大量表达合成，最终实现半纤维素的原位快速降解。
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公开(公告)号：CN104140944A
公开(公告)日：2014-11-12
申请号：CN201410373906.8
申请日：2014-07-31
Applicant: 上海交通大学
CPC classification number: Y02A40/12
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域的硝酸盐还原酶的工程菌及其实现方法，以灰略红链霉菌基因组DNA为模板，与含有酶切位点的引物进行PCR扩增依次得到编码硝酸盐还原酶催化亚基及电子转移亚基的核苷酸序列；然后将扩增得到的基因序列依次连接到共表达载体pETDuet‐1，最终获得重组共表达载体pETDuet‐NB‐NA；之后将该硝酸盐还原酶表达载体转化到大肠杆菌表达菌株。本发明针对现有技术存在的由于硝酸盐还原酶在生物体内多为胞内酶且表达量较低导致的应用范围和效果严重受限等不足，应用基因工程手段实现硝酸盐还原酶体外的大量表达合成，对于次生盐渍化土壤的快速修复乃至实现精准农业具有重大意义。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN103881958A
公开(公告)日：2014-06-25
申请号：CN201410126924.6
申请日：2014-03-31
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 一种生物工程技术领域的基于β‐葡萄糖苷酶的工程菌及其实现方法，该β‐葡萄糖苷酶基因克隆自灰色链霉菌(Streptomyces？griseorubens)JSD‐1，将其连接到表达载体上得到重组表达载体，进一步将该重组表达载体导入大肠杆菌并诱导合成β‐葡萄糖苷酶。本发明克服现有技术中β‐葡萄糖苷酶多为胞内酶且表达量非常低等不足，应用基因工程菌表达本发明所述的β‐葡萄糖苷酶基因制备β‐葡萄糖苷酶，可为工业化发酵生产β‐葡萄糖苷酶提供一种新方法。
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公开(公告)号：CN103865867A
公开(公告)日：2014-06-18
申请号：CN201410125508.4
申请日：2014-03-31
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 一种生物工程技术领域的基于胞外α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶的工程菌及其实现方法，该阿拉伯呋喃糖苷酶基因克隆自灰略红链霉菌(Streptomyces？griseus)JSD-1，将其连接到表达载体上得到重组表达载体，进一步将该重组表达载体导入大肠杆菌并诱导合成阿拉伯呋喃糖苷酶。本发明克服现有技术中阿拉伯呋喃糖苷酶多为诱导表达，表达量较低等不足，应用基因工程菌表达本发明所述的基因制备阿拉伯呋喃糖苷酶，可为工业化发酵生产α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶提供一种新方法。
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公开(公告)号：CN103525739A
公开(公告)日：2014-01-22
申请号：CN201310512371.3
申请日：2013-10-25
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 一种土壤修复技术领域的硝酸盐同化细菌及其在修复设施次生盐渍化土壤中的应用，通过硝酸盐同化细菌NCT-2以土壤中硝态氮作为氮源，并将其同化为其它形态的无机氮或细胞组分，从而实现对硝态氮的降解转化、降低土壤中硝态氮含量并对土壤进行修复。该硝酸盐同化细菌NCT-2为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)，该硝酸盐同化细菌NCT-2保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.4698。本发明对环境中硝态氮有很强的同化转化能力，对环境适应性强；此外，还具有溶磷能力。因此该菌在修复设施栽培次生盐渍化土壤和制备微生物肥料上有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN103468618A
公开(公告)日：2013-12-25
申请号：CN201310439733.0
申请日：2013-09-25
Applicant: 上海交通大学
CPC classification number: Y02W30/43
Abstract: 一种生物环保技术领域的具有解磷能力的纤维素降解细菌及其应用，该纤维素降解细菌JSD-12为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)，保藏编号为CGMCC No.7923，保藏日期为2013年7月15日。该细菌不仅对纤维素具有较强的降解能力，同时还对秸秆中半纤维素和果胶组分有一定的分解能力；该细菌繁殖迅速并且可耐受60℃以上的高温，可制成高温堆肥的添加菌剂；此外该菌还具有解磷能力，可供生产菌肥。
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公开(公告)号：CN104120103A
公开(公告)日：2014-10-29
申请号：CN201410373726.X
申请日：2014-07-31
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域的谷氨酸合酶的工程菌及其实现方法，以灰略红链霉菌基因组DNA为模板，与含有酶切位点的引物进行PCR扩增依次得到编码谷氨酸合酶小亚基及大亚基的核苷酸序列；然后将扩增得到的基因序列依次连接到共表达载体pETDuet‐1，最终获得重组共表达载体pETDuet‐GG‐GF；之后将该谷氨酸合酶表达载体转化到大肠杆菌表达菌株。本发明针对现有技术存在的由于谷氨酸合酶在生物体内多为胞内酶且表达量较低导致的应用范围和效果严重受限等不足，应用基因工程手段实现其体外的大量表达合成，此外本发明通过在重组蛋白添加聚组氨酸标签的方法，方便了后期蛋白的纯化。
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