公开(公告)号：CN114317580A

公开(公告)日：2022-04-12

申请号：CN202210037651.2

申请日：2022-01-13

申请人： 上海交通大学 ,  上海来益生物药物研究开发中心有限责任公司

发明人： 钱秀萍 ,  胡梦怡 ,  戈梅 ,  魏维 ,  饶敏 ,  张芸 ,  王孟圆

IPC分类号： C12N15/74 ,  C12N15/66 ,  C12N15/113 ,  C12N1/21 ,  C12R1/01

摘要： 本发明公开了一种含有双sgRNA的特异性基因敲除的CRISPR/Cas9编辑质粒，包括双sgRNA和上下游同源臂，所述双sgRNA的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；所述的上下游同源臂是以A.keratiniphila HCCB10007基因组为模板，分别用SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10所示的引物进行PCR扩增获得。本发明还公开了所述的CRISPR/Cas9编辑质粒在水解角蛋白拟无枝酸菌中进行大片段基因敲除的应用。本发明实现了在水解角蛋白拟无枝酸菌中进行80kb以上大片段基因的精准敲除。