公开(公告)号：CN103710372A

公开(公告)日：2014-04-09

申请号：CN201310754411.5

申请日：2013-12-31

申请人： 东华大学

发明人： 周宇荀 ,  马骁骁 ,  肖君华 ,  李凯

IPC分类号： C12N15/66

摘要： 本发明涉及一种用于功能研究的miR-505高表达载体的构建方法，包括：（1）采用PCR方法得到shRNA基因，并用限制性内切酶EcoRI进行酶切，得到经EcoRI酶切后的miR-505片段；（2）将FUGW载体或Fsy载体用EcoRI进行酶切，并CIAP处理使其5’端去磷酸化，然后将处理后的线性化FUGW载体或Fsy载体与经EcoRI酶切后的miR-505片段进行连接，转化至大肠杆菌感受态细胞DH5α，提取质粒，经PCR和BamHI酶切检测目的基因插入的方向和拷贝数，测序确认后，得到表达载体。本发明的构建方法操作简单，得到的载体可实现miR-505成熟体在哺乳动物细胞中的高表达。

公开(公告)号：CN103710372B

公开(公告)日：2015-08-12

申请号：CN201310754411.5

申请日：2013-12-31

申请人： 东华大学

发明人： 周宇荀 ,  马骁骁 ,  肖君华 ,  李凯

IPC分类号： C12N15/66

摘要： 本发明涉及一种用于功能研究的miR-505高表达载体的构建方法，包括：（1）采用PCR方法得到shRNA基因，并用限制性内切酶EcoRI进行酶切，得到经EcoRI酶切后的miR-505片段；（2）将FUGW载体或Fsy载体用EcoRI进行酶切，并CIAP处理使其5’端去磷酸化，然后将处理后的线性化FUGW载体或Fsy载体与经EcoRI酶切后的miR-505片段进行连接，转化至大肠杆菌感受态细胞DH5α，提取质粒，经PCR和BamHI酶切检测目的基因插入的方向和拷贝数，测序确认后，得到表达载体。本发明的构建方法操作简单，得到的载体可实现miR-505成熟体在哺乳动物细胞中的高表达。