公开(公告)号：CN101455839A

公开(公告)日：2009-06-17

申请号：CN200810151125.9

申请日：2008-09-26

申请人： 中国人民解放军第四军医大学

发明人： 秦红 ,  黄威权 ,  金晓航 ,  刘玉林 ,  张欣 ,  刘子冬

IPC分类号： A61K39/395 ,  C12N15/31 ,  A61P31/04

摘要： 本发明提供了一种迟缓爱德华菌抗独特型抗体基因工程疫苗及其制备方法，采用RT－PCR方法从分泌迟缓爱德华菌独特型单克隆抗体杂交瘤细胞株中克隆出VH和VL可变区基因，在VH和VL可变区基因间引入连接肽(Gly4Ser)3，体外构建VL－Linker－VH形式的单链抗体scFv基因，克隆至表达载体PET28a并在大肠杆菌中表达，表达产物纯后，用SDS－PAGE、Western blot及ELASA鉴定：迟缓爱德华菌抗独特型单链抗体基因scFv在BL21菌中获得表达，表达产物以不溶性包涵体形式存在，经溶解包涵体，纯化和体外复性，获得高纯度的单链抗体片段，重组蛋白相对分子量为27kD。海鱼免疫保护率平均为80％以上。

公开(公告)号：CN101455839B

公开(公告)日：2012-02-08

申请号：CN200810151125.9

申请日：2008-09-26

申请人： 中国人民解放军第四军医大学

发明人： 秦红 ,  黄威权 ,  金晓航 ,  刘玉林 ,  张欣 ,  刘子冬

IPC分类号： A61K39/395 ,  C12N15/31 ,  A61P31/04

摘要： 本发明提供了一种迟缓爱德华菌抗独特型抗体基因工程疫苗及其制备方法，采用RT-PCR方法从分泌迟缓爱德华菌独特型单克隆抗体杂交瘤细胞株中克隆出VH和VL可变区基因，在VH和VL可变区基因间引入连接肽(Gly4Ser)3，体外构建VL-Linker-VH形式的单链抗体scFv基因，克隆至表达载体PET28a并在大肠杆菌中表达，表达产物纯后，用SDS-PAGE、Western blot及ELASA鉴定：迟缓爱德华菌抗独特型单链抗体基因scFv在BL21菌中获得表达，表达产物以不溶性包涵体形式存在，经溶解包涵体，纯化和体外复性，获得高纯度的单链抗体片段，重组蛋白相对分子量为27kD。海鱼免疫保护率平均为80％以上。