公开(公告)号：CN106244460B

公开(公告)日：2019-08-13

申请号：CN201510642944.3

申请日：2015-09-30

申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所

发明人： 龚振兴 ,  蔡建平 ,  刘保红 ,  殷昊 ,  李法财 ,  马雪婷

IPC分类号： C12N1/10 ,  C12N3/00

摘要： 本发明公开了一种无外源菌DNA污染的球虫卵囊的制备方法，属于生物技术领域。本发明通过使用无微生物DNA污染的二次蒸馏水并配制所需试剂，采用1.2M蔗糖漂浮沉淀法对卵囊进行纯化，纯化后的卵囊经15％次氯酸钠溶液和细胞裂解液双重处理，充分裂解残留的细菌等杂质，再通过TE和二次蒸馏水反复漂洗去除粘附于卵囊壁的外源菌DNA。研究表明，经本发明方法处理后的卵囊纯度高，所抽提的基因组DNA经PCR检测无外源菌DNA污染，且整个过程操作简单，成本低，并对卵囊不产生任何影响。本发明的提出对球虫卵囊高纯度基因组DNA提取、基因克隆、全基因组(重)测序，以及表观遗传调控的研究具有重要意义。

公开(公告)号：CN112760392B

公开(公告)日：2021-08-27

申请号：CN202011284368.7

申请日：2020-11-17

申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所

发明人： 颜新敏 ,  陈芙 ,  储岳峰 ,  刘保红 ,  陈胜利 ,  郝华芳 ,  马丽娜 ,  耿尚景超 ,  宋相阳

IPC分类号： C12Q1/689 ,  C12Q1/04 ,  C12N15/11 ,  C12R1/35

摘要： 本发明公开了一种用于检测绵羊肺炎支原体的特异性PCR引物，本发明首先通过对绵羊肺炎支原体基因测序和对比，筛选到用于检测绵羊肺炎支原体的靶序列，其基因序列如SEQ ID NO.1所示，然后设计了检测其特异性PCR引物，可将Mo与Mccp、Mmc、精氨酸支原体以及常见反刍动物支原体、细菌区分开，显示出良好的特异性，可作为新诊断靶标，以此为基础建立更具临床实用性的Mo诊断技术。

公开(公告)号：CN106244460A

公开(公告)日：2016-12-21

申请号：CN201510642944.3

申请日：2015-09-30

申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所

发明人： 龚振兴 ,  蔡建平 ,  刘保红 ,  殷昊 ,  李法财 ,  马雪婷

IPC分类号： C12N1/10 ,  C12N3/00

摘要： 本发明公开了一种无外源菌DNA污染的球虫卵囊的制备方法，属于生物技术领域。本发明通过使用无微生物DNA污染的二次蒸馏水并配制所需试剂，采用1.2M蔗糖漂浮沉淀法对卵囊进行纯化，纯化后的卵囊经15％次氯酸钠溶液和细胞裂解液双重处理，充分裂解残留的细菌等杂质，再通过TE和二次蒸馏水反复漂洗去除粘附于卵囊壁的外源菌DNA。研究表明，经本发明方法处理后的卵囊纯度高，所抽提的基因组DNA经PCR检测无外源菌DNA污染，且整个过程操作简单，成本低，并对卵囊不产生任何影响。本发明的提出对球虫卵囊高纯度基因组DNA提取、基因克隆、全基因组(重)测序，以及表观遗传调控的研究具有重要意义。

公开(公告)号：CN112760392A

公开(公告)日：2021-05-07

申请号：CN202011284368.7

申请日：2020-11-17

申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所

发明人： 颜新敏 ,  陈芙 ,  储岳峰 ,  刘保红 ,  陈胜利 ,  郝华芳 ,  马丽娜 ,  耿尚景超 ,  宋相阳

IPC分类号： C12Q1/689 ,  C12Q1/04 ,  C12N15/11 ,  C12R1/35

摘要： 本发明公开了一种用于检测绵羊肺炎支原体的特异性PCR引物，本发明首先通过对绵羊肺炎支原体基因测序和对比，筛选到用于检测绵羊肺炎支原体的靶序列，其基因序列如SEQ ID NO.1所示，然后设计了检测其特异性PCR引物，可将Mo与Mccp、Mmc、精氨酸支原体以及常见反刍动物支原体、细菌区分开，显示出良好的特异性，可作为新诊断靶标，以此为基础建立更具临床实用性的Mo诊断技术。