公开(公告)号：CN114410587A

公开(公告)日：2022-04-29

申请号：CN202210029737.0

申请日：2022-01-12

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 郑海学 ,  张克山 ,  张婷 ,  杨博 ,  申超超 ,  田宏 ,  茹毅 ,  杨帆 ,  朱紫祥 ,  冯涛 ,  郭建宏 ,  刘湘涛

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/34 ,  C12N15/867 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明涉及非洲猪瘟病毒技术领域，具体涉及一种提高非洲猪瘟病毒非靶细胞MA‑104细胞系感染滴度的方法。将非洲猪瘟病毒的D1133L基因片段插入慢病毒载体中，得到重组慢病毒载体，然后将重组慢病毒转染MA104细胞系，得到稳定表达D1133L基因的MA‑104细胞系MA‑104/D1133L，利用该细胞系接种非洲猪瘟病毒，可大大提高非洲猪瘟病毒滴度。感染ASFV后的MA‑104/D1133L可以多次收毒。本发明得到的MA‑104/D1133L细胞株与野生型MA‑104相比，ASFV病毒滴度显著提高。

公开(公告)号：CN114958782B

公开(公告)日：2023-03-24

申请号：CN202210258522.6

申请日：2022-03-16

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 郑海学 ,  张克山 ,  张婷 ,  冯涛 ,  杨博 ,  杨行 ,  史喜绢 ,  田宏 ,  茹毅 ,  杨帆 ,  朱紫祥 ,  郭建宏 ,  何继军 ,  刘湘涛

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/34 ,  C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种IPTG诱导性缺失D1133L基因的非洲猪瘟病毒减毒株及其应用。本发明首先发现了非洲猪瘟病毒D1133L蛋白能够抑制IFN‑β及其下游因子ISG‑15、ISG‑56细胞因子的产生，具有较强的免疫抑制作用，可作为免疫抑制剂应用。另外构建了IPTG诱导性缺失D1133L基因的非洲猪瘟病毒减毒株，具体是将大肠杆菌lac操纵基因‑阻遏物系统将筛选表达盒插入到ASFV的非结构蛋白D1133L之前得到重组病毒。在存在IPTG的情况下，此重组病毒与野生型具有相似特征，无IPTG存在时，D1133L蛋白的表达会被抑制。

公开(公告)号：CN114958782A

公开(公告)日：2022-08-30

申请号：CN202210258522.6

申请日：2022-03-16

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 郑海学 ,  张克山 ,  张婷 ,  冯涛 ,  杨博 ,  杨行 ,  史喜绢 ,  田宏 ,  茹毅 ,  杨帆 ,  朱紫祥 ,  郭建宏 ,  何继军 ,  刘湘涛

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/34 ,  C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种IPTG诱导性缺失D1133L基因的非洲猪瘟病毒减毒株及其应用。本发明首先发现了非洲猪瘟病毒D1133L蛋白能够抑制IFN‑β及其下游因子ISG‑15、ISG‑56细胞因子的产生，具有较强的免疫抑制作用，可作为免疫抑制剂应用。另外构建了IPTG诱导性缺失D1133L基因的非洲猪瘟病毒减毒株，具体是将大肠杆菌lac操纵基因‑阻遏物系统将筛选表达盒插入到ASFV的非结构蛋白D1133L之前得到重组病毒。在存在IPTG的情况下，此重组病毒与野生型具有相似特征，无IPTG存在时，D1133L蛋白的表达会被抑制。

公开(公告)号：CN112481220A

公开(公告)日：2021-03-12

申请号：CN202011206761.4

申请日：2020-11-03

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 郑海学 ,  张克山 ,  侯景 ,  申超超 ,  张婷 ,  冯涛 ,  田宏 ,  杨帆 ,  朱紫祥 ,  茹毅 ,  党文 ,  李丹 ,  刘湘涛

IPC: C12N5/20 ,  C07K16/40 ,  C07K16/08 ,  C12P21/08 ,  G01N33/577 ,  G01N33/569 ,  A61K39/42 ,  A61P31/20

Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，涉及抗非洲猪瘟病毒解旋酶D1133L的单克隆抗体以及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株。本发明采用小鼠腹腔培养和体外细胞培养杂交瘤细胞7D12制备单克隆抗体，效价测定检测结果表明，本发明杂交瘤细胞株7D12所分泌的单克隆抗体诱导小鼠产生的腹水抗体效价为107，杂交瘤细胞培养上清的效价达到1:1280。本发明制备的单克隆抗体为研究ASFV解旋酶功能及其分子机制积累了关键性的生物学材料，基于该单克隆抗体本身生物学特性建立的间接免疫荧光抗原检测方法为ASFV精准、快速诊断提供了支撑，本发明制备的单克隆抗体能显著抑制或者阻断ASFV复制为ASFV预防和治疗提供了可能的产品支持。

公开(公告)号：CN112481220B

公开(公告)日：2021-09-14

申请号：CN202011206761.4

申请日：2020-11-03

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 郑海学 ,  张克山 ,  侯景 ,  申超超 ,  张婷 ,  冯涛 ,  田宏 ,  杨帆 ,  朱紫祥 ,  茹毅 ,  党文 ,  李丹 ,  刘湘涛

IPC: C12N5/20 ,  C07K16/40 ,  C07K16/08 ,  C12P21/08 ,  G01N33/577 ,  G01N33/569 ,  A61K39/42 ,  A61P31/20

Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，涉及抗非洲猪瘟病毒解旋酶D1133L的单克隆抗体以及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株。本发明采用小鼠腹腔培养和体外细胞培养杂交瘤细胞7D12制备单克隆抗体，效价测定检测结果表明，本发明杂交瘤细胞株7D12所分泌的单克隆抗体诱导小鼠产生的腹水抗体效价为107，杂交瘤细胞培养上清的效价达到1:1280。本发明制备的单克隆抗体为研究ASFV解旋酶功能及其分子机制积累了关键性的生物学材料，基于该单克隆抗体本身生物学特性建立的间接免疫荧光抗原检测方法为ASFV精准、快速诊断提供了支撑，本发明制备的单克隆抗体能显著抑制或者阻断ASFV复制为ASFV预防和治疗提供了可能的产品支持。