公开(公告)号：CN119667152A

公开(公告)日：2025-03-21

申请号：CN202411846827.4

申请日：2024-12-16

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)

Inventor： 刘新生 ,  白英杰 ,  张莉萍 ,  于瑞明 ,  潘丽 ,  张中旺 ,  郭慧琛

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/577 ,  G01N33/543 ,  G01N33/58 ,  C07K16/10

Abstract: 本发明公开了一种基于S蛋白单克隆抗体的猪δ‑冠状病毒双抗夹心ELISA检测试剂盒、其使用方法及应用。采用ExpiCHO表达系统表达PDCoV S蛋白，然后将纯化的S蛋白作为免疫原免疫小鼠，获得单克隆抗体。然后，分别使用单克隆抗体3D7和HRP标记的MAb 9G4作为捕获和检测抗体，建立了双抗体夹心ELISA试剂盒。该试剂盒具有良好的灵敏度，对纯化的S蛋白的检测限为0.12ng/mL，对PDCoV的检测限为1.96×103copies/μL。特异性分析表明，所述试剂盒与其他在临床症状上与PDCoV相似的猪肠道冠状病毒PEDV、TGEV和PoRV无交叉反应性，且与RT‑PCR方法的一致性达到91.03％，Kappa值为0.814，表明该试剂盒用于临床样品检测的可靠性。此外，该试剂盒还可以定量评价PDCoV灭活疫苗和亚单位疫苗中S蛋白的含量，为评价这些疫苗提供了有力的工具。

公开(公告)号：CN119019549B

公开(公告)日：2025-04-15

申请号：CN202411439904.4

申请日：2024-10-15

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)

Inventor： 刘新生 ,  于瑞明 ,  张莉萍 ,  张中旺 ,  潘丽 ,  王永录 ,  郭慧琛

IPC: C07K16/10 ,  G01N33/569 ,  G01N33/543 ,  G01N33/58 ,  A61K39/42 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明提供了一种抗猪δ冠状病毒中和活性纳米抗体及其应用。本发明利用噬菌体展示技术构建了PDCoV S蛋白的纳米文库，并筛选获得了可与PDCoV以及S蛋白具有高度亲和力的特异性纳米抗体Nb1、Nb3或Nb8。进一步地以Nb3为基础，建立了一种用于临床快速、高效地检测PDCoV抗体的竞争ELISA方法。此外，体内外中和活性评价结果显示，Nb3抗PDCoV的中和效价可达到1:128，在攻毒前后分别随牛奶口服给药仔猪5mg/ml Nb3能够显著降低仔猪腹泻发病率，保护3/5的仔猪免受PDCoV强毒株的攻击。因此，本发明所筛选的抗PDCoV特异性纳米抗体Nb3，将为PDCoV的临床防控提供一种技术和材料支撑。

公开(公告)号：CN119019549A

公开(公告)日：2024-11-26

申请号：CN202411439904.4

申请日：2024-10-15

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)

Inventor： 刘新生 ,  于瑞明 ,  张莉萍 ,  张中旺 ,  潘丽 ,  王永录 ,  郭慧琛

IPC: C07K16/10 ,  G01N33/569 ,  G01N33/543 ,  G01N33/58 ,  A61K39/42 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明提供了一种抗猪δ冠状病毒中和活性纳米抗体及其应用。本发明利用噬菌体展示技术构建了PDCoV S蛋白的纳米文库，并筛选获得了可与PDCoV以及S蛋白具有高度亲和力的特异性纳米抗体Nb1、Nb3或Nb8。进一步地以Nb3为基础，建立了一种用于临床快速、高效地检测PDCoV抗体的竞争ELISA方法。此外，体内外中和活性评价结果显示，Nb3抗PDCoV的中和效价可达到1:128，在攻毒前后分别随牛奶口服给药仔猪5mg/ml Nb3能够显著降低仔猪腹泻发病率，保护3/5的仔猪免受PDCoV强毒株的攻击。因此，本发明所筛选的抗PDCoV特异性纳米抗体Nb3，将为PDCoV的临床防控提供一种技术和材料支撑。