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公开(公告)号：CN112941088B
公开(公告)日：2023-06-16
申请号：CN202110155985.5
申请日：2021-02-04
摘要： 本发明公开了一种与布氏杆菌毒力相关的基因及其在布氏杆菌毒力评价及制备弱毒布氏杆菌中的应用。本发明首先利用蛋白结构域及3D结构预测鉴定到一种与布氏杆菌毒力相关的基因——abcS基因。利用RecA同源重组的方法，以卡那霉素抗性基因作为筛选标记替换abcS基因，构建了布氏杆菌abcS基因缺失株M28ΔabcS。荧光定量PCR试验表明，M28ΔabcS突变株中毒力因子四型分泌系统的表达严重下降。利用Balb/c小鼠持留感染模型评价了布氏杆菌abcS基因对布氏杆菌M28毒力的影响。结果显示：abcS基因缺失显著降低感染时脾脏的肿胀，同时严重影响细菌在小鼠脾脏内复制存活的能力，证实该基因是布氏杆菌M28的毒力相关基因。本发明的提出为布氏杆菌疫苗和药品的研发，提供了新的技术手段。
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公开(公告)号：CN113265380A
公开(公告)日：2021-08-17
申请号：CN202110579583.8
申请日：2021-05-26
摘要： 本发明公开了一种细菌限制‑修饰系统及其应用。所述的限制‑修饰系统包括限制‑修饰复合酶，其中所述的限制‑修饰复合酶由R亚基和M亚基组成，所述的R亚基由基因c5372(res53)编码，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述的M亚基由基因c5373(mod53)编码，其氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明通过构建搭载该细菌限制‑修饰系统的重组质粒并转化入普通大肠杆菌菌株MG1655中，使得MG1655能够显著的抵抗外源噬菌体的感染，说明此限制‑修饰系统能够极大的提高大肠杆菌抵抗噬菌体感染的能力。因此，本发明的提出为构建抗噬菌体的工程菌或活载体疫苗菌提供了新的技术手段。
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公开(公告)号：CN113373171A
公开(公告)日：2021-09-10
申请号：CN202110579577.2
申请日：2021-05-26
摘要： 本发明公开了一种在大肠杆菌内稳定遗传的酵母‑大肠杆菌穿梭质粒及其构建方法。所述的穿梭质粒是基于细菌‑酵母人工染色体，从pGEN‑MCS质粒上通过PCR扩增得到hok‑sok和par元件，然后通过连接将稳定遗传元件hok‑sok和parA构建入细菌‑酵母人工染色体中，进而获得方便克隆长片段DNA、无抗性且在大肠杆菌内稳定遗传的酵母‑大肠杆菌穿梭质粒。优选的，所述的穿梭质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供的穿梭质粒载体，不但可实现酵母、细菌内穿梭，可在酵母中通过同源重组进行多片段DNA组装，还可以稳定的在大肠杆菌中复制、遗传，便于进行DNA提取。
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公开(公告)号：CN112941088A
公开(公告)日：2021-06-11
申请号：CN202110155985.5
申请日：2021-02-04
摘要： 本发明公开了一种与布氏杆菌毒力相关的基因及其在布氏杆菌毒力评价及制备弱毒布氏杆菌中的应用。本发明首先利用蛋白结构域及3D结构预测鉴定到一种与布氏杆菌毒力相关的基因——abcS基因。利用RecA同源重组的方法，以卡那霉素抗性基因作为筛选标记替换abcS基因，构建了布氏杆菌abcS基因缺失株M28ΔabcS。荧光定量PCR试验表明，M28ΔabcS突变株中毒力因子四型分泌系统的表达严重下降。利用Balb/c小鼠持留感染模型评价了布氏杆菌abcS基因对布氏杆菌M28毒力的影响。结果显示：abcS基因缺失显著降低感染时脾脏的肿胀，同时严重影响细菌在小鼠脾脏内复制存活的能力，证实该基因是布氏杆菌M28的毒力相关基因。本发明的提出为布氏杆菌疫苗和药品的研发，提供了新的技术手段。
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公开(公告)号：CN113265380B
公开(公告)日：2023-09-19
申请号：CN202110579583.8
申请日：2021-05-26
摘要： 本发明公开了一种细菌限制‑修饰系统及其应用。所述的限制‑修饰系统包括限制‑修饰复合酶，其中所述的限制‑修饰复合酶由R亚基和M亚基组成，所述的R亚基由基因c5372(res53)编码，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述的M亚基由基因c5373(mod53)编码，其氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明通过构建搭载该细菌限制‑修饰系统的重组质粒并转化入普通大肠杆菌菌株MG1655中，使得MG1655能够显著的抵抗外源噬菌体的感染，说明此限制‑修饰系统能够极大的提高大肠杆菌抵抗噬菌体感染的能力。因此，本发明的提出为构建抗噬菌体的工程菌或活载体疫苗菌提供了新的技术手段。
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