公开(公告)号：CN104928320A

公开(公告)日：2015-09-23

申请号：CN201510387359.3

申请日：2015-07-03

申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所

发明人： 鲁帅尧 ,  马开利 ,  乞素冬 ,  李鸿钧 ,  和占龙 ,  马进 ,  陈瑜 ,  吴正存

IPC分类号： C12N15/867 ,  C12N15/66 ,  C12N15/65

摘要： 本发明公开了一种携带恒河猴抵抗素剪接体基因慢病毒载体的构建方法，运用普通PCR直接同时扩增抵抗素全长和剪接体基因，用胶回收方法直接回收剪接体条带，然后进行载体的快速克隆测序；使用慢病毒载体高效转染试剂转染所有慢病毒载体质粒，并使用灭活血清包装慢病毒颗粒，并获得高滴度的重组慢病毒原液。本发明可免去PCR+1方法筛选大量的工作和高额的费用，消除获得剪接体基因的概率限制，并高效、快速、廉价地直接获得剪接体基因；可高效转染慢病毒载体质粒，并获得高滴度的重组慢病毒滴度。

公开(公告)号：CN104928320B

公开(公告)日：2018-06-01

申请号：CN201510387359.3

申请日：2015-07-03

申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所

发明人： 鲁帅尧 ,  马开利 ,  乞素冬 ,  李鸿钧 ,  和占龙 ,  马进 ,  陈瑜 ,  吴正存

IPC分类号： C12N15/867 ,  C12N15/66 ,  C12N15/65

摘要： 本发明公开了一种携带恒河猴抵抗素剪接体基因慢病毒载体的构建方法，运用普通PCR直接同时扩增抵抗素全长和剪接体基因，用胶回收方法直接回收剪接体条带，然后进行载体的快速克隆测序；使用慢病毒载体高效转染试剂转染所有慢病毒载体质粒，并使用灭活血清包装慢病毒颗粒，并获得高滴度的重组慢病毒原液。本发明可免去PCR+1方法筛选大量的工作和高额的费用，消除获得剪接体基因的概率限制，并高效、快速、廉价地直接获得剪接体基因；可高效转染慢病毒载体质粒，并获得高滴度的重组慢病毒滴度。