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发明公开
建鲤原代肝细胞的分离培养方法无效

公开(公告)号：CN104293731A

公开(公告)日：2015-01-21

申请号：CN201410535197.9

申请日：2014-10-13

申请人： 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心

发明人： 杜金梁 , 曹丽萍 , 殷国俊 , 贾睿 , 刘英娟 , 申玉金 , 赵才源

IPC分类号： C12N5/071

摘要： 本发明公开了建鲤原代肝细胞的分离培养方法，选取健康无伤的建鲤，从建鲤尾静脉处采血，完毕后对鱼体表面消毒，放入超净台内无菌采集建鲤肝脏；用含双抗的PBS溶液漂洗，加入胰酶消化液，消化处理温度为26~28℃，时间为15-20min；消化结束后加入培养基A终止消化，消化液经过200目过滤网进行过滤，收集滤液；分别用50g和30g各离心5min，然后用培养基B进行洗涤2次，去除上清液，得到沉淀即为提取的肝细胞，制成细胞悬液，铺板培养。本实验方法简单快捷，能很大程度上节约分离时间，本实验所用分离时间大约为40min，且获得的肝细胞生长状况良好，红细胞数量少，细胞存活率在95%左右。