公开(公告)号：CN110283777B

公开(公告)日：2020-12-29

申请号：CN201910622127.X

申请日：2019-07-10

申请人： 中国海洋大学

发明人： 郭华荣 ,  宋欣 ,  周阳

IPC分类号： C12N5/07

摘要： 本发明通过建立有效的对虾细胞3D培养与传代培养方法，从而提供了一种对虾细胞连续培养技术，可将其应用于对虾永生性细胞系的建立。本发明优化了基质胶的添加比例，从而提供了一种用于对虾细胞3D培养的基质胶制备方法；本发明还优化了对虾细胞完全培养基的配方，并选其作为对虾血淋巴细胞的抗凝剂与稀释剂，选用了基质胶表面附着生长的3D培养方式，从而提供了一种对虾外周血淋巴细胞的分离与3D培养技术，对虾血淋巴细胞以圆形单个细胞和细胞团/球的方式附着生长于基质胶表面，其存活和生长能力均优于2D培养效果；本发明还提供了一种3D培养对虾细胞的传代方法，传代后的对虾血淋巴细胞可以很好地附着于基质胶表面生长，传代后的存活率可高达90％以上。

公开(公告)号：CN110283777A

公开(公告)日：2019-09-27

申请号：CN201910622127.X

申请日：2019-07-10

申请人： 中国海洋大学

发明人： 郭华荣 ,  宋欣 ,  周阳

IPC分类号： C12N5/07

摘要： 本发明通过建立有效的对虾细胞3D培养与传代培养方法，从而提供了一种对虾细胞连续培养技术，可将其应用于对虾永生性细胞系的建立。本发明优化了基质胶的添加比例，从而提供了一种用于对虾细胞3D培养的基质胶制备方法；本发明还优化了对虾细胞完全培养基的配方，并选其作为对虾血淋巴细胞的抗凝剂与稀释剂，选用了基质胶表面附着生长的3D培养方式，从而提供了一种对虾外周血淋巴细胞的分离与3D培养技术，对虾血淋巴细胞以圆形单个细胞和细胞团/球的方式附着生长于基质胶表面，其存活和生长能力均优于2D培养效果；本发明还提供了一种3D培养对虾细胞的传代方法，传代后的对虾血淋巴细胞可以很好地附着于基质胶表面生长，传代后的存活率可高达90％以上。