公开(公告)号：CN114045356A

公开(公告)日：2022-02-15

申请号：CN202210029979.X

申请日：2022-01-12

申请人： 仲恺农业工程学院

发明人： 林进添 ,  梁芳 ,  吴仲真 ,  舒本水 ,  宾淑英 ,  杨清

IPC分类号： C12Q1/689 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11 ,  C12R1/01

摘要： 本发明公开了一种基于RPA‑CRISPR‑Cas12a体系可视化检测柑橘黄龙病的试剂盒及方法。所述试剂盒包含RPA引物和crRNA引导序列；通过先对待测样品进行RPA扩增，再在crRNA序列介导下，引导CRISPR‑Cas12a体系对RPA扩增产物进行识别结合并切割目标双链DNA激活非特异性核酸酶功能，然后任意切割体系中的ssDNA荧光探针得到裂解产物，最后通过裂解产物的显色检测进行判断。本发明通过RPA扩增及crRNA识别可双重特异地对检测柑橘黄龙病进行检测，特异性强，且在灵敏度上可低至2拷贝/μL，可以更早发现感染柑橘黄龙病的植株，对柑橘黄龙病进行防治。

公开(公告)号：CN114045356B

公开(公告)日：2022-04-26

申请号：CN202210029979.X

申请日：2022-01-12

申请人： 仲恺农业工程学院

发明人： 林进添 ,  梁芳 ,  吴仲真 ,  舒本水 ,  宾淑英 ,  杨清

IPC分类号： C12Q1/689 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11 ,  C12R1/01

摘要： 本发明公开了一种基于RPA‑CRISPR‑Cas12a体系可视化检测柑橘黄龙病的试剂盒及方法。所述试剂盒包含RPA引物和crRNA引导序列；通过先对待测样品进行RPA扩增，再在crRNA序列介导下，引导CRISPR‑Cas12a体系对RPA扩增产物进行识别结合并切割目标双链DNA激活非特异性核酸酶功能，然后任意切割体系中的ssDNA荧光探针得到裂解产物，最后通过裂解产物的显色检测进行判断。本发明通过RPA扩增及crRNA识别可双重特异地对检测柑橘黄龙病进行检测，特异性强，且在灵敏度上可低至2拷贝/μL，可以更早发现感染柑橘黄龙病的植株，对柑橘黄龙病进行防治。