公开(公告)号：CN107513502A

公开(公告)日：2017-12-26

申请号：CN201710605754.3

申请日：2017-07-24

Applicant: 华东师范大学

Inventor： 朱品宽 ,  向升 ,  何一凡 ,  张成花 ,  许玲

IPC: C12N1/15 ,  C12N15/80 ,  C12P7/26 ,  C07C45/78 ,  C07C45/79 ,  C07C49/747 ,  G01N30/90 ,  C12R1/645

CPC classification number: C12N9/88 ,  C07C45/78 ,  C07C45/79 ,  C12P7/26 ,  C12Y402/01094 ,  G01N30/90 ,  C07C49/747

Abstract: 本发明属于生物技术领域，以野生型灰霉菌菌株为背景菌株，对其黑色素合成途径一个关键酶小柱孢酮脱水酶进行基因敲除，构建能够大量产生小柱孢酮的灰霉菌基因缺失突变菌株Δbcscd1，主要步骤如下：利用融合PCR技术，将目的基因bcscd1的5'-UTR和3'-UTR分别与潮霉素片段Hph的上下游编码区融合，获得上下游融合片段，利用PEG介导的原生质体转化法将融合片段转入野生型原生质体中进行双交换同源重组，通过筛选鉴定获得基因缺失突变株Δbcscd1。通过本发明方法构建得到的基因缺失突变株遗传稳定性高且具有较低的毒性。本发明还提出了一种通过萃取，旋蒸以及柱层析等步骤特异性地提纯小柱孢酮的方法。