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发明公开
一种人活性颗粒酶K重组蛋白的制备方法无效

公开(公告)号：CN103205444A

公开(公告)日：2013-07-17

申请号：CN201310090856.8

申请日：2013-03-21

申请人： 华东师范大学

发明人： 江文正 , 龙凤英 , 杜佳妮 , 陈冉 , 孔晓波 , 史亚茹

IPC分类号： C12N15/57 , C12N15/70 , C12N9/64

摘要： 本发明涉及一种人活性颗粒酶K重组蛋白（rhGzmK）的制备方法，该重组蛋白去除了人颗粒酶K（hGzmK）N端的24个氨基酸，并在C端增加了6个组氨酸，以方便用镍离子柱进行纯化。其流程是：抽提人NK92细胞的总RNA，利用RT-PCR技术得到hGzmK基因，将之与原核表达载体pET24a(+)相连，构建重组表达质粒pET24a(+)-hGzmK，经转化大肠杆菌BL21后获得工程菌，该工程菌经IPTG诱导可表达rhGzmK。该重组蛋白以包涵体的形式表达，可利用镍亲和层析柱进行纯化，其纯度可达95%以上。该方法具有操作简单、产量高、重组蛋白易于纯化等特点，且纯化蛋白具有较高的生物学活性。