公开(公告)号：CN105755131A

公开(公告)日：2016-07-13

申请号：CN201610217197.3

申请日：2016-04-09

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 左波 ,  吴欣玉 ,  纪攀龙 ,  徐珍 ,  熊远著

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/11

CPC classification number: C12Q1/6888 ,  C12Q2600/156

Abstract: 本发明属于猪的遗传标记制备技术领域，具体涉及一种与猪肉质和胴体性状关联的遗传标记，该标记从猪BMP?3b基因中筛选得到，其序列如SEQ ID NO：1和图4所示，在该序列425位碱基处发生一个A/G碱基突变，导致AlwNⅠ?RFLP多态性。筛选方法为：从猪血液中提取基因组DNA，设计引物，PCR扩增，PCR产物克隆、测序，序列比较分析，SNP检测，标记与肉质性状间相关性分析。公开了猪BMP?3b基因CDS区的SNP分型检测技术，发现该A/G突变位点与大理石花纹、色值、肌内脂肪含量等肉质性状显著相关；与平均背膘厚、眼肌高以及板油等胴体性状显著相关。本发明为猪标记辅助选择提供了新的标记资源。

公开(公告)号：CN102747082B

公开(公告)日：2014-06-18

申请号：CN201110451945.1

申请日：2011-12-29

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 徐德全 ,  熊远著 ,  张子见

IPC: C12N15/113 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明属于猪分子遗传学领域，具体涉及一种猪肌肉特异表达基因ITGB1BP2启动子的克隆鉴定与应用。本发明的步骤包括：提取大白猪不同组织总RNA，进行荧光定量PCR，确定其在肌肉组织中特异表达。以大白猪肌肉组织总DNA为模板，设计引物，PCR扩增获得猪ITGB1BP2基因5’端侧翼1442bp的序列，构建15个长度不同的ITGB1BP2启动子缺失片段的荧光素酶报告基因质粒，转染C2C12细胞，检测每个缺失片段的启动子活性，鉴定猪ITGB1BP2基因启动子。本发明克隆的猪ITGB1BP2基因启动子的核苷酸序列如序列表SEQ？ID？NO：1所示，为猪的遗传改良和转基因提供了重要的元件和手段，可强化转基因表达的肌肉组织特异性和稳定性。

公开(公告)号：CN103255135A

公开(公告)日：2013-08-21

申请号：CN201210039360.3

申请日：2012-02-21

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 左波 ,  林斌 ,  徐在言 ,  熊远著

IPC: C12N15/11 ,  C12N15/10 ,  C12Q1/68

Abstract: 本发明属于猪分子标记制备技术领域，具体涉及一种与猪脂肪沉积性状相关的遗传标记、制备方法及应用。从猪PPARδ基因5’调控区片段克隆得到猪脂肪性状关的标记，其序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，在所述序列第316碱基处有一个A/G碱基突变，导致EcoR I-RFLP多态性。主要步骤：从猪血液中提取基因组DNA，设计引物，PCR扩增，PCR产物克隆、测序，序列比较分析，SNP检测，标记与脂肪沉积性状间相关性分析，突变影响转录活性变化的试验验证等。还公开了猪PPARδ基因5’调控区的SNP分型检测技术，发现该A/G突变位点与背膘厚等脂肪沉积性状呈显著相关。

公开(公告)号：CN101818195B

公开(公告)日：2012-04-18

申请号：CN200910272588.5

申请日：2009-11-02

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 李凤娥 ,  高思 ,  雷彬 ,  罗立凡 ,  蒋思文 ,  邓昌彦 ,  熊远著

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明属于猪遗传标记制备与应用技术领域，具体涉及一种猪miR-27a前体侧翼基因片段作为猪产仔数性状的遗传标记，其制备方法与应用。本发明获得了一种与猪产仔数性状相关的遗传标记，它包含猪miR-27a前体侧翼基因片段，它是序列表SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5所示的核苷酸序列；在序列表SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5序列的461bp处有一个C461-T461的碱基突变，该突变导致PCR-HpaII-RFLP多态性。设计了扩增miR-27a前体侧翼基因片段的引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：7所示。本发明公开了该遗传标记的制备方法及其在猪标记辅助选择中的应用。

公开(公告)号：CN101974527A

公开(公告)日：2011-02-16

申请号：CN201010278620.3

申请日：2010-09-10

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 任竹青 ,  熊远著 ,  蒋思文 ,  邓昌彦

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/10 ,  C12Q1/68

Abstract: 本发明属于猪的动物生物技术与育种领域，具体涉及猪异柠檬酸脱氢酶基因IDH3β的启动子的克隆、活性分析和启动子区突变研究。本发明的步骤包括：从猪血液中提取基因组DNA，设计引物，采用TAIL-PCR技术经过两轮扩增获得猪IDH3β基因上游5’侧翼2447bp的基因组碱基序列，并进行序列比较分析和遗传变异检测；采用5’端缺失策略扩增IDH3β基因上游5’侧翼区，将获得的DNA序列构建荧光素酶报告基因载体，测定其启动子活性，鉴定IDH3β基因启动子。本发明克隆的猪异柠檬酸脱氢酶基因IDH3β的启动子的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：4所示。本发明为猪的遗传改良应用提供了基因资源。

公开(公告)号：CN1480532A

公开(公告)日：2004-03-10

申请号：CN02139001.0

申请日：2002-09-04

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 蒋思文 ,  彭健 ,  刘桂兰 ,  熊远著 ,  郑嵘

IPC: C12N15/16 ,  C12Q1/68

Abstract: 本发明属于猪分子生物学技术领域，具体涉及猪黑素皮质素－3受体(melanocortin－3 receptor，MC3R)基因及其单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)检测技术领域。其步骤包括：从猪血液基因组提取DNA、根据人和鼠MC3R基因保守区设计引物、PCR扩增、PCR产物直接测序、序列比较分析、单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)检测。本发明公开了猪MC3R基因DNA序列和SNP分型的检测技术，为猪的标记辅助育种提供了新的标记。

公开(公告)号：CN103421779B

公开(公告)日：2015-06-03

申请号：CN201210200635.7

申请日：2012-06-18

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 熊远著 ,  张子见 ,  徐德全 ,  左波 ,  雷明刚

IPC: C12N15/113 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明属于动物基因工程技术领域，具体涉及到猪的脂肪特异性酶A2基因ADPLA的不同长度启动子区域的分离鉴定和功能验证。从猪的基因组中克隆了脂肪特异性酶A2基因ADPLA（GeneBank登录号为100512584）上游13个个不同长度的启动子，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO：2-SEQ ID NO：14所示；结果表明-656bp到-616bp和-521bp到-347bp有独立的启动活性。本发明同时公开了13个不同缺失启动子片段、相应重组表达载体的制备方法及双荧光素酶活性检测系统对启动子活性分析的应用。

公开(公告)号：CN102776273B

公开(公告)日：2014-06-18

申请号：CN201110445328.0

申请日：2011-12-26

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 刘敏 ,  徐德全 ,  孙小瑞 ,  刘倩 ,  夏晓亮 ,  熊远著

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/113

Abstract: 本发明属于猪分子标记制备技术领域，具体涉及一种猪？MLC2的5’侧翼启动子片段作为猪胴体性状的遗传标记及制备方法与应用。该遗传标记具有如序列表SEQ？ID？NO：1和SEQ？ID？NO：2所示的核苷酸序列。在SEQ？ID？NO：1和SEQ？ID？NO：2所示的序列的第53bp处分别存在一个C/A和A/C的突变，该等位基因的突变引起DraIII-RFLP的多态性。利用该遗传标记对大白猪和梅山猪F2代进行了与猪胴体性状的关联分析，检测了不同基因型的启动子的转录活性。本发明还公开了该遗传标记的分型检测方法，为猪胴体性状分子标记辅助选择提供了新的遗传标记和检测方法。

公开(公告)号：CN103421779A

公开(公告)日：2013-12-04

申请号：CN201210200635.7

申请日：2012-06-18

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 熊远著 ,  张子见 ,  徐德全 ,  左波 ,  雷明刚

IPC: C12N15/113 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明属于动物基因工程技术领域，具体涉及到猪的脂肪特异性酶A2基因ADPLA的不同长度启动子区域的分离鉴定和功能验证。从猪的基因组中克隆了脂肪特异性酶A2基因ADPLA（GeneBank登录号为100512584）上游13个个不同长度的启动子，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO：2-SEQ ID NO：14所示；结果表明-656bp到-616bp和-521bp到-347bp有独立的启动活性。本发明同时公开了13个不同缺失启动子片段、相应重组表达载体的制备方法及双荧光素酶活性检测系统对启动子活性分析的应用。

公开(公告)号：CN102766629B

公开(公告)日：2013-10-16

申请号：CN201110445351.X

申请日：2011-12-26

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 徐德全 ,  刘敏 ,  孙小瑞 ,  夏晓亮 ,  刘倩 ,  熊远著 ,  蒋思文

IPC: C12N15/113 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明属于猪基因工程技术领域，具体涉及一种猪肌肉特异表达基因MLC2启动子的克隆鉴定与应用。其步骤包括：提取“大白猪”肌肉组织总DNA，设计引物，PCR扩增获得猪MLC2基因5’端侧翼核苷酸序列(1704bp)，构建15个长度不同的MLC2启动子缺失片段的荧光素酶报告基因质粒，转染C2C12细胞，检测每个缺失片段的启动子的活性，鉴定获得猪MLC2基因的启动子。其中，猪MLC2基因启动子的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示(1704bp)，在所述的MLC2基因的启动子中还包含具有活性的15个启动子的片段，它们的核苷酸序列分别如序列表SEQ ID NO：2-16所示。本发明为猪的遗传改良和转基因提供了重要的元件和手段，可强化猪转基因表达的肌肉组织特异性和稳定性。