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公开(公告)号：CN107488700B
公开(公告)日：2020-02-18
申请号：CN201710951708.9
申请日：2017-09-30
Applicant: 华中科技大学同济医学院附属协和医院
Abstract: 本发明公开了一种模拟异常血流力学刺激对瓣膜细胞钙化作用的方法，涉及生物模型构建技术领域，包括以下步骤：S1，从主动脉瓣组织中采用胶原酶消化法提取瓣膜间质细胞制成细胞上清培养基；S2，将磁珠与RGD肽原液混合制得附着有RGD肽的磁珠；S3，将附着有RGD肽的磁珠加入步骤S1制得的细胞上清培养基中，弃上清，PBS清洗后加入第一培养基中培养；将所述第一培养基放入磁力扭曲仪中，通过调节磁力扭曲仪的磁力大小、频率和磁力作用时间模拟异常血流对瓣膜间质细胞的力学刺激，观察瓣膜间质细胞的钙化状态。本发明可实现微观模拟异常血流力学刺激在瓣膜钙化中的作用，同时，缩短单纯钙化培养基构建钙化模型所需时间。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108165525A
公开(公告)日：2018-06-15
申请号：CN201711340953.2
申请日：2017-12-14
Applicant: 华中科技大学同济医学院附属协和医院
Inventor： 董念国 , 刘保庆 , 李飞 , 尚小珂 , 史峰 , 邱雪峰 , 史嘉玮 , 陈思 , 吴龙 , 刘隽炜 , 刘义华 , 胡行健 , 洪昊 , 李华东 , 孙永丰 , 乔韡华 , 李庚 , 朱鹏 , 李光周 , 王怡轩 , 刘发远 , 谢飞 , 刘名 , 刘春耕 , 黄玉明
IPC: C12N5/077
Abstract: 本发明公开了一种用于心肌细胞分离提纯的密度梯度液试剂盒及使用方法，涉及生物细胞培养技术领域，试剂盒包括第一试剂、第二试剂，其中：第一试剂包括超纯水、Percoll液和缓冲液，其体积比为1：3：1；第二试剂包括超纯水、Percoll液和缓冲液，其体积比为2：2：1；第一试剂和第二试剂中的缓冲液包括35.064‑40.032份Nacl，1.975‑2.013份Kcl，0.615‑1.107份MgSO4.7H2O，4.865‑5.226份葡萄糖，0.301‑0.384份KH2PO4，0.213‑0.365份Na2HPO4，23.830‑29.788份4‑羟乙基哌嗪乙磺酸。
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公开(公告)号：CN107488700A
公开(公告)日：2017-12-19
申请号：CN201710951708.9
申请日：2017-09-30
Applicant: 华中科技大学同济医学院附属协和医院
Abstract: 本发明公开了一种模拟异常血流力学刺激对瓣膜细胞钙化作用的方法，涉及生物模型构建技术领域，包括以下步骤：S1，从主动脉瓣组织中采用胶原酶消化法提取瓣膜间质细胞制成细胞上清培养基；S2，将磁珠与RGD肽原液混合制得附着有RGD肽的磁珠；S3，将附着有RGD肽的磁珠加入步骤S1制得的细胞上清培养基中，弃上清，PBS清洗后加入第一培养基中培养；将所述第一培养基放入磁力扭曲仪中，通过调节磁力扭曲仪的磁力大小、频率和磁力作用时间模拟异常血流对瓣膜间质细胞的力学刺激，观察瓣膜间质细胞的钙化状态。本发明可实现微观模拟异常血流力学刺激在瓣膜钙化中的作用，同时，缩短单纯钙化培养基构建钙化模型所需时间。
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公开(公告)号：CN108004205A
公开(公告)日：2018-05-08
申请号：CN201711342017.5
申请日：2017-12-14
Applicant: 华中科技大学同济医学院附属协和医院
Inventor： 董念国 , 刘保庆 , 李飞 , 尚小珂 , 史峰 , 邱雪峰 , 史嘉玮 , 陈思 , 吴龙 , 刘隽炜 , 刘义华 , 胡行健 , 洪昊 , 李华东 , 孙永丰 , 乔韡华 , 李庚 , 朱鹏 , 李光周 , 王怡轩 , 耿冰川 , 刘发远 , 谢飞 , 刘名 , 刘春耕 , 黄玉明
IPC: C12N5/077
Abstract: 本发明公开了一种用于心肌细胞分离提纯的心肌缓冲液试剂盒及使用方法，涉及生物细胞培养技术领域，试剂盒包括心肌缓冲粉末，心肌缓冲粉末包括7.012-8.007份Nacl，0.395-0.403份Kcl，0.123-0.222份MgSO4.7H2O，0.973-1.046份葡萄糖，0.060-0.077份KH2PO4，0.042-0.071份Na2HPO4，4.766-5.958份4-羟乙基哌嗪乙磺酸。采用本发明的试剂盒进中心肌缓冲粉末为低钙粉末，不含有胰酶或添加化学抑制剂，避免了胰酶化学抑制剂对心肌细胞的损伤，适宜于保持心肌细胞活性，因此，采用本发明的试剂盒可最大程度上保证了心肌细胞的活性，细胞存活率更高。
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公开(公告)号：CN107881147A
公开(公告)日：2018-04-06
申请号：CN201711342026.4
申请日：2017-12-14
Applicant: 华中科技大学同济医学院附属协和医院
Inventor： 董念国 , 刘保庆 , 李飞 , 尚小珂 , 史峰 , 邱雪峰 , 史嘉玮 , 陈思 , 吴龙 , 刘隽炜 , 刘义华 , 胡行健 , 洪昊 , 李华东 , 孙永丰 , 乔韡华 , 张超 , 王寅 , 李庚 , 朱鹏 , 刘名 , 耿冰川 , 代金池 , 白鹏 , 姜烨凡
IPC: C12N5/077
CPC classification number: C12N5/0657 , C12N2500/30 , C12N2509/00 , C12N2533/32 , C12N2533/52 , C12N2533/54
Abstract: 本发明公开了一种用于心肌细胞分离提纯的试剂盒及使用方法，涉及生物细胞培养技术领域，试剂盒包括第一试剂混合物、第二试剂混合物和第三试剂混合物，其中：第一试剂混合物包括7.012-8.007份Nacl，0.395-0.403份Kcl，0.123-0.222份MgSO4.7H2O，0.973-1.046份葡萄糖，0.060-0.077份KH2PO4，0.042-0.071份Na2HPO4，4.766-5.958份4-羟乙基哌嗪乙磺酸；第二试剂混合物包括超纯水、Percoll液和缓冲液，其体积比为1：3：1；第三试剂混合物包括超纯水、Percoll液和缓冲液，其体积比为2：2：1。采用本发明的试剂盒进行心肌原代细胞分离提纯，大大缩短心肌细胞提纯耗时。且心肌细胞与非心肌细胞分离效果更佳，心肌细胞纯度更高。
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公开(公告)号：CN107881146A
公开(公告)日：2018-04-06
申请号：CN201711340838.5
申请日：2017-12-14
Applicant: 华中科技大学同济医学院附属协和医院
Inventor： 董念国 , 刘保庆 , 李飞 , 尚小珂 , 史峰 , 邱雪峰 , 史嘉玮 , 陈思 , 吴龙 , 刘隽炜 , 刘义华 , 胡行健 , 洪昊 , 李华东 , 孙永丰 , 乔韡华 , 张超 , 王寅 , 李庚 , 朱鹏 , 刘名 , 代金池 , 白鹏 , 姜烨凡
IPC: C12N5/077
CPC classification number: C12N5/0657 , C12N2500/30 , C12N2509/00 , C12N2533/32 , C12N2533/52 , C12N2533/54
Abstract: 本发明公开了一种心肌细胞分离提纯方法，涉及生物细胞培养技术领域，S1，将配好的包被液加入于六孔板中孵育；S2，将心肌缓冲液加入培养皿中，取心脏置于装有心肌缓冲液的培养皿中漂洗；S3，剪下的心脏组织置于装有心肌缓冲液的离心管中；S4，将0.05％Ⅱ型胶原酶加入离心管中，摇床培养，弃上清；S5，将0.1％Ⅱ型胶原酶加入步骤S4处理后的离心管中，摇床培养，取上清放入装有血清的离心管中混匀；S6，上清混匀后过滤、离心，离心后用心肌缓冲液重悬，将细胞悬液加入离心管中；S7，将细胞悬液缓慢加入配好的密度梯度液中，进行离心；S8，将吸出的中间层置于离心管中，进行离心，离心后重悬，计数后加入步骤S1处理后的六孔板培养。
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