公开(公告)号：CN114438087A

公开(公告)日：2022-05-06

申请号：CN202210211936.3

申请日：2022-03-04

申请人： 华南农业大学

发明人： 亓文宝 ,  尹有勤 ,  廖明 ,  刘乐乐 ,  邢金超 ,  蒋誉婷 ,  丁仕萍

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/867 ,  C12N15/66 ,  C12N5/10 ,  C12N7/00 ,  C12N7/02 ,  C12R1/91

摘要： 本发明公开一种敲除人SLC25A12基因的细胞株及其应用，属于分子生物学和细胞生物学技术领域。本发明提供一种靶向敲除人SLC25A12基因的gRNA序列，其核苷酸序列如SEQID NO.1所示。利用CRISPR‑Cas9技术首次在人Hela细胞基因组上敲除SLC25A12基因，获得SLC25A12敲除的Hela细胞株，且敲除细胞株活性、生长速度等方面均与对照细胞无明显差异，是较为理想的SLC25A12敲除的细胞模型；且操作简便，周期短，成本低，改造后细胞株稳定，可用于研究SLC25A12蛋白在糖胺聚糖代谢和蛋白质代谢等方面的具体作用机制。本发明获得的细胞株能够显著提高乙型脑炎病毒毒株的复制水平。

公开(公告)号：CN111334482A

公开(公告)日：2020-06-26

申请号：CN202010243659.5

申请日：2020-03-31

申请人： 华南农业大学

发明人： 亓文宝 ,  刘乐乐 ,  张又月 ,  廖明 ,  邢金超 ,  梁佳琪

IPC分类号： C12N7/04 ,  C12N15/40 ,  A61K39/12 ,  A61P31/14 ,  C12R1/93

摘要： 本发明公开了一种复制性增强的减毒JEV及其制备方法与应用，属于生物医学技术领域。本发明的减毒JEV是日本乙型脑炎病毒NS5蛋白644位天冬氨酸突变为苏氨酸，和3’非编码区248位碱基T突变为C、254位碱基A突变为G、258位点碱基A突变为G，所得的日本乙型脑炎病毒。本发明方法获得的突变毒株在复制能力上有了明显的提升，同时致病性降低，用于疫苗生产中，可提高产量，降低成本。利用本发明方法获得突变毒株的时间周期短，操作简便，可加快弱毒毒株的培育和病毒致病机制研究的进程。

公开(公告)号：CN111334482B

公开(公告)日：2023-03-14

申请号：CN202010243659.5

申请日：2020-03-31

申请人： 华南农业大学

发明人： 亓文宝 ,  刘乐乐 ,  张又月 ,  廖明 ,  邢金超 ,  梁佳琪

IPC分类号： C12N7/04 ,  C12N15/40 ,  A61K39/12 ,  A61P31/14 ,  C12R1/93

摘要： 本发明公开了一种复制性增强的减毒JEV及其制备方法与应用，属于生物医学技术领域。本发明的减毒JEV是日本乙型脑炎病毒NS5蛋白644位天冬氨酸突变为苏氨酸，和3’非编码区248位碱基T突变为C、254位碱基A突变为G、258位点碱基A突变为G，所得的日本乙型脑炎病毒。本发明方法获得的突变毒株在复制能力上有了明显的提升，同时致病性降低，用于疫苗生产中，可提高产量，降低成本。利用本发明方法获得突变毒株的时间周期短，操作简便，可加快弱毒毒株的培育和病毒致病机制研究的进程。