公开(公告)号：CN110129349A

公开(公告)日：2019-08-16

申请号：CN201910282838.7

申请日：2019-04-10

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 孙坚 ,  何玉张 ,  李龚 ,  郭亚亚 ,  王晓佩 ,  刘雅红 ,  廖晓萍

IPC: C12N15/66 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12Q1/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了基于ISApl1插入序列构建能表达荧光的自杀型质粒及菌株的方法。该自杀型质粒的构建方法如下：通过AflII和XhoI双酶切pUC19-tpm质粒和pUC19-RP4质粒，然后将电泳后回收的产物用连接酶连接，构建pTFX-RP4质粒；然后通过EcoRI和Spel双酶切pTFX-RP4质粒和pBBR1MCS4-LuxCDAB质粒，再将电泳后回收的产物用连接酶连接，构建能表达荧光的自杀型质粒。再进一步将自杀型质粒转化大肠杆菌WM3064感受态细胞，并将获得的荧光标记的大肠杆菌与目标菌株混合培养，可构建荧光菌株。本发明方法效率高、成本低，适用于构建耐药菌株、药动药效学评价或筛选药物。

公开(公告)号：CN110129349B

公开(公告)日：2020-12-11

申请号：CN201910282838.7

申请日：2019-04-10

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 孙坚 ,  何玉张 ,  李龚 ,  郭亚亚 ,  王晓佩 ,  刘雅红 ,  廖晓萍

IPC: C12N15/66 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12Q1/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了基于ISApl1插入序列构建能表达荧光的自杀型质粒及菌株的方法。该自杀型质粒的构建方法如下：通过AflII和XhoI双酶切pUC19‑tpm质粒和pUC19‑RP4质粒，然后将电泳后回收的产物用连接酶连接，构建pTFX‑RP4质粒；然后通过EcoRI和Spel双酶切pTFX‑RP4质粒和pBBR1MCS4‑LuxCDAB质粒，再将电泳后回收的产物用连接酶连接，构建能表达荧光的自杀型质粒。再进一步将自杀型质粒转化大肠杆菌WM3064感受态细胞，并将获得的荧光标记的大肠杆菌与目标菌株混合培养，可构建荧光菌株。本发明方法效率高、成本低，适用于构建耐药菌株、药动药效学评价或筛选药物。