一种微小隐孢子虫检测用TSP7多肽序列及其应用

    公开(公告)号:CN108752423B

    公开(公告)日:2019-12-17

    申请号:CN201810519141.2

    申请日:2018-05-25

    Applicant: 吉林大学

    Abstract: 本发明提供了一种微小隐孢子虫检测用TSP7多肽序列及其应用,它是利用微小隐孢子虫多肽TSP7与KLH偶联后作为抗原,免疫Balb/c小鼠,制备单克隆抗体,收集样品(卵囊),脱囊液脱囊,室温孵育成子孢子,透化液透化,分别加入单克隆抗体、二抗、PBS缓冲液、荧光染料、抗荧光猝灭剂,利用荧光显微镜观察样本。经反复多次实验表明,偶联KLH的六种隐孢子虫特异性多肽具有良好的免疫源性,免疫小鼠可以均可得到理想效价的杂交瘤细胞;每次筛选的都能筛选出效价均达到1:16000以上的单克隆抗体,都可用作荧光检测。利用TSP7合成多肽做制备的单克隆抗体可以很灵敏的标记在微小隐孢子虫子孢子的表面,没有发生交叉反应。

    一种微小隐孢子虫检测用TSP7多肽序列及其应用

    公开(公告)号:CN108752423A

    公开(公告)日:2018-11-06

    申请号:CN201810519141.2

    申请日:2018-05-25

    Applicant: 吉林大学

    Abstract: 本发明提供了一种微小隐孢子虫检测用TSP7多肽序列及其应用,它是利用微小隐孢子虫多肽TSP7与KLH偶联后作为抗原,免疫Balb/c小鼠,制备单克隆抗体,收集样品(卵囊),脱囊液脱囊,室温孵育成子孢子,透化液透化,分别加入单克隆抗体、二抗、PBS缓冲液、荧光染料、抗荧光猝灭剂,利用荧光显微镜观察样本。经反复多次实验表明,偶联KLH的六种隐孢子虫特异性多肽具有良好的免疫源性,免疫小鼠可以均可得到理想效价的杂交瘤细胞;每次筛选的都能筛选出效价均达到1:16000以上的单克隆抗体,都可用作荧光检测。利用TSP7合成多肽做制备的单克隆抗体可以很灵敏的标记在微小隐孢子虫子孢子的表面,没有发生交叉反应。

    一种靶向隐孢子虫解旋酶的抗隐孢子虫小分子先导化合物

    公开(公告)号:CN119351519A

    公开(公告)日:2025-01-24

    申请号:CN202411465057.9

    申请日:2024-10-21

    Applicant: 吉林大学

    Abstract: 本发明涉及一种靶向隐孢子虫解旋酶的抗隐孢子虫小分子先导化合物;包括如下步骤:S1、药物靶标解旋酶(CpeIF4A)的酶活参数以及Roc‑A对其的抑制效果检测:表达纯化含MBP标签的CpeIF4A重组蛋白;检测其酶活性;检测Roc‑A对酶活性的抑制效果;通过热转移实验确定Roc‑A与CpeIF4A间亲和力;S2、体外药效测定:评价Roc‑A对子孢子的直接杀灭能力;通过体外细胞感染模型确定Roc‑A对隐孢子虫的抑制效果,获得EC50值,并确定其主要发挥抑制作用的胞内时期;检测Roc‑A对宿主细胞的毒性,获得TC5值),获得体外抗虫选择性指数(SI);S3、体内药效测试:建立C57BL/6IFN‑γ基因敲除小鼠感染模型评价Roc‑A的有效性和安全性。本发明确定Roc‑A具有进一步开发为抗隐孢子虫药物的潜力,并证实了靶向eIF4A可抗隐孢子虫感染。

    检测用隐孢子虫卵囊壁外壁标记蛋白质及其应用

    公开(公告)号:CN114031679A

    公开(公告)日:2022-02-11

    申请号:CN202111323961.2

    申请日:2021-11-10

    Applicant: 吉林大学

    Abstract: 本发明公开了一种隐孢子虫卵囊壁蛋白,它的氨基酸序列如序列表SEQ ID N0.1、2、3或4所示;隐孢子虫特异性多肽,氨基序列为:A‑1:C‑ENIEQESNEANI或A‑2:KITGSHKVFRSSFYSR‑或A‑3:C‑SLSVNEYNAEIVDHE或A‑4:C‑NRAYRIDKYVPRGFT;抗隐孢子虫卵囊壁蛋白抗体,它能与隐孢子虫卵囊壁的外表面特异性结合;抗隐孢子虫特异性多肽抗体,它是采用所述的隐孢子虫特异性多肽的蛋白制备的抗体;在检测隐孢子虫的应用。本发明蛋白抗体均证明该蛋白是隐孢子虫卵囊壁外壁蛋白,且荧光信号较强;多肽抗体滴度高,检测效果好,不发生交叉反应,特异性良好。

    隐孢子虫cgd8_1420蛋白质作为卵囊壁外壁标记蛋白质的应用

    公开(公告)号:CN115925860B

    公开(公告)日:2025-02-11

    申请号:CN202210804249.2

    申请日:2022-07-09

    Applicant: 吉林大学

    Abstract: 本发明公开了隐孢子虫cgd8_1420蛋白质作为卵囊壁外壁标记蛋白质的应用,它的氨基酸序列如序列表SEQ ID N0.1所示;本发明还公开了隐孢子虫卵囊壁蛋白特异性多肽,它的氨基序列为:VLQETIYNFKNFKC;抗隐孢子虫卵囊壁外壁蛋白抗体,它能与隐孢子虫卵囊壁外壁的外表面特异性结合;抗隐孢子虫卵囊壁蛋白特异性多肽抗体,它是采用所述隐孢子虫卵囊壁蛋白质特异性多肽制备的抗体;抗隐孢子虫卵囊壁外壁蛋白抗体或抗隐孢子虫卵囊壁蛋白特异性多肽抗体在检测隐孢子虫的应用;卵囊壁外壁蛋白质,其位于隐孢子虫卵囊壁的外表面,该蛋白作为检测用抗原可行,该蛋白重组蛋白抗体能用于未破壁隐孢子虫卵囊的免疫学检测。

    隐孢子虫cgd2_3080卵囊壁外壁标记蛋白质及其应用

    公开(公告)号:CN116143875A

    公开(公告)日:2023-05-23

    申请号:CN202210804264.7

    申请日:2022-07-09

    Applicant: 吉林大学

    Abstract: 本发明公开了一种隐孢子虫cgd2_3080卵囊壁外壁标记蛋白质及其应用,其碱基序列如序列表SEQ ID N0.1所示;隐孢子虫卵囊壁蛋白特异性多肽,它的氨基序列为:SGSATQGGPSTTEC;抗隐孢子虫卵囊壁外壁蛋白抗体,它能与隐孢子虫卵囊壁外壁的外表面特异性结合;抗隐孢子虫卵囊壁外壁特异性多肽抗体,它是采用所述的隐孢子虫卵囊壁蛋白特异性多肽的蛋白制备的抗体;抗隐孢子虫卵囊壁外壁蛋白抗体或抗隐孢子虫卵囊壁蛋白特异性多肽抗体在检测隐孢子虫的应用;该多肽兔血清抗体具有良好的敏感性,当血清1:100稀释时荧光强度很亮;环境中样本的检测中,多肽抗体只识别隐孢子虫卵囊,不交叉反应,特异性良好。

    隐孢子虫活卵囊的双探针qRT-PCR检测试剂盒及其方法

    公开(公告)号:CN114058722A

    公开(公告)日:2022-02-18

    申请号:CN202111309845.5

    申请日:2021-11-07

    Applicant: 吉林大学

    Abstract: 本发明公开了同步检测C.parvum微小隐孢子虫、C.hominis人隐孢子虫、C.tyzzeri泰泽隐孢子虫的qRT‑PCR引物及探针,它包括:引物Crypt6_3920_1201F:5’‑AGTGATTCAG ATTAYTTAGAAGGTG‑3’;三种隐孢子虫特异性探针;及环境水中隐孢子虫检测方法,它包括:1)取水样,每1升水添加硅胶颗粒0.142克,离心、浓缩到1mL;2)提取隐孢子虫卵囊RNA;3)qRT‑PCR进行检测得到的RNA;本发明优点在于:本发明双探针与单探针相比,提高了扩增效率;检测的最低卵囊数为0.5个卵囊;所设计的探针特异性效果良好;检测环境水样方法可行。

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