公开(公告)号：CN116121169B

公开(公告)日：2024-08-20

申请号：CN202211653947.3

申请日：2022-12-22

申请人： 四川农业大学

发明人： 梁东 ,  夏惠 ,  郭玉琪 ,  何遵珍 ,  邓红红 ,  梁艳 ,  田新博 ,  郎宇旋

IPC分类号： C12N5/04 ,  C12N15/82

摘要： 本发明提供了一种猕猴桃愈伤原生质体高效分离的方法及其在亚细胞定位中的应用，属于植物细胞学领域。在本发明中，猕猴桃原生质体分离的方法为：愈伤组织和酶解液按照1.5～2g:10ml的比例混合进行酶解；所述酶解液中甘露醇的浓度为0.6～0.8M、纤维素酶浓度为1.8～2.5wt％、离析酶浓度为0.4～0.6wt％时，分离得到的原生质体产量最大，活力最高，收获的原生质体产量达到2.8×106个·g‑1FW，原生质体活力高达87％。本发明中猕猴桃原生质体的制备方法为猕猴桃属植物开展基因功能和分子育种研究奠定了基础。

公开(公告)号：CN116121169A

公开(公告)日：2023-05-16

申请号：CN202211653947.3

申请日：2022-12-22

申请人： 四川农业大学

发明人： 梁东 ,  夏惠 ,  郭玉琪 ,  何遵珍 ,  邓红红 ,  梁艳 ,  田新博 ,  郎宇旋

IPC分类号： C12N5/04 ,  C12N15/82

摘要： 本发明提供了一种猕猴桃愈伤原生质体高效分离的方法及其在亚细胞定位中的应用，属于植物细胞学领域。在本发明中，猕猴桃原生质体分离的方法为：愈伤组织和酶解液按照1.5～2g:10ml的比例混合进行酶解；所述酶解液中甘露醇的浓度为0.6～0.8M、纤维素酶浓度为1.8～2.5wt％、离析酶浓度为0.4～0.6wt％时，分离得到的原生质体产量最大，活力最高，收获的原生质体产量达到2.8×106个·g‑1FW，原生质体活力高达87％。本发明中猕猴桃原生质体的制备方法为猕猴桃属植物开展基因功能和分子育种研究奠定了基础。

公开(公告)号：CN118813697A

公开(公告)日：2024-10-22

申请号：CN202411063688.8

申请日：2024-08-05

申请人： 四川农业大学

发明人： 梁东 ,  夏惠 ,  何遵珍 ,  张晓丽 ,  田新博 ,  梁艳 ,  张迎迎 ,  汪亚 ,  周琼 ,  王小凤 ,  康冬梅 ,  骆学萍 ,  李兴茂 ,  黄刚

IPC分类号： C12N15/84 ,  C12N15/65 ,  C12N15/54 ,  A01H4/00

摘要： 本发明公开了一种毛花猕猴桃愈伤组织的遗传转化方法，属于组织培养领域。以毛花猕猴桃叶片为外植体，以添加2,4‑D和6‑苄氨基嘌呤的MS固体培养基为愈伤诱导培养基，诱导得到淡黄色、松软的愈伤组织。之后继代培养3～4周，转接固体培养基上预培养3d，在含重组子的农杆菌侵染液中侵染30min，然后共培养3d再转入含卡那霉素的筛选培养基，培养40～50d可以获得抗性愈伤组织。通过DNA和RNA水平检测表明获得过表达AcGST1愈伤。本发明建立首个毛花猕猴桃愈伤组织遗传转化体系，并成功将AcGST过表达获得转基因猕猴桃愈伤，本发明为猕猴桃基因功能鉴定和新种质的创制提供了技术支撑。