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公开(公告)号：CN118667740A
公开(公告)日：2024-09-20
申请号：CN202410937682.2
申请日：2024-07-12
申请人： 国家烟草质量监督检验中心 , 内蒙古昆明卷烟有限责任公司
摘要： 本申请涉及一种高效表达烟酰胺磷酸核糖转移酶的工程菌及其应用，属于生物技术和基因编辑技术领域。本申请提供的高效表达烟酰胺磷酸核糖转移酶的工程菌，基于BL21(DE3)进行序列优化，并选择合适的载体pET‑30a进行转化，所构建获得工程菌能够高效表达活性更高的烟酰胺磷酸核糖转移酶，应用在工业生产发酵中能够大幅提高烟酰胺磷酸核糖转移酶的发酵收益，具有重要的市场经济价值和应用场景。
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公开(公告)号：CN118726298A
公开(公告)日：2024-10-01
申请号：CN202410937681.8
申请日：2024-07-12
申请人： 国家烟草质量监督检验中心 , 内蒙古昆明卷烟有限责任公司
发明人： 庞永强 , 田大勇 , 李翔宇 , 郭春生 , 郝捷 , 姜兴益 , 林森 , 张善林 , 郝娜 , 郭晓伟 , 杨宇忱 , 罗彦波 , 窦旭 , 柴颖 , 刘欣然 , 张洪非 , 乔月梅 , 朱风鹏
摘要： 本申请涉及一种含烟酰胺磷酸核糖转移酶的发酵液纯化方法及其应用，属于含烟酰胺磷酸核糖转移酶酶纯化技术领域。所述方法包括如下步骤：1)将含有烟酰胺磷酸核糖转移酶的发酵液离心后进行重旋，超声破碎细胞后再次离心，收集上清液；2)上清液加入His‑tag在3～5℃共孵育后收集流出液；3)流出液依次用低浓度咪唑溶液洗杂、高浓度咪唑溶液洗脱，获得洗脱溶液；4)洗脱溶液在3～5℃经透析除去咪唑后，获得纯化的烟酰胺磷酸核糖转移酶；所述低浓度咪唑溶液中咪唑浓度0～25mM，所述高浓度咪唑溶液中咪唑浓度50～250mM。该纯化工艺操作步骤简单，在保证Nampt蛋白提纯纯度的同时，能够兼顾较好的收率，能够明显提高工业生产效益，具有重要的工业应用价值。
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公开(公告)号：CN118685475A
公开(公告)日：2024-09-24
申请号：CN202410937679.0
申请日：2024-07-12
申请人： 内蒙古昆明卷烟有限责任公司 , 国家烟草质量监督检验中心
摘要： 本发明提供了一种烟酰胺单核苷酸的制备方法，涉及酶工程领域。本申请中首次将来源于Comamonadaceae bacterium的烟酰胺磷酸核糖转移酶突变体应用于催化生成烟酰胺单核酸的过程中能够有效提高烟酰胺单核酸的产率，为烟酰胺单核苷酸生产提供了一种新的高产率生产方法。
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公开(公告)号：CN118638759A
公开(公告)日：2024-09-13
申请号：CN202410937680.3
申请日：2024-07-12
申请人： 国家烟草质量监督检验中心 , 内蒙古昆明卷烟有限责任公司
发明人： 庞永强 , 乔月梅 , 田大勇 , 李翔宇 , 郝捷 , 林森 , 姜兴益 , 柴颖 , 张善林 , 郝娜 , 郭晓伟 , 杨宇忱 , 罗彦波 , 窦旭 , 刘欣然 , 朱风鹏 , 郑超 , 张洪非
摘要： 本发明提供了一种烟酰胺磷酸核糖转移酶突变体及其应用，涉及生物工程技术领域。该烟酰胺磷酸核糖转移酶突变体包含相对于参比序列以下位点的一个或多个突变的蛋白质：第190位、第308位、第348位、第387位、第241位，其中各氨基酸位置编号由参比序列定义，参比序列如SEQ ID No.1所示。本申请中证明了将烟酰胺磷酸核糖转移酶第190位氨基酸由苯丙氨酸残基突变为色氨酸残基能够有效提升酶相对活性，并将其应用于催化生成烟酰胺单核酸的过程中能够有效提高烟酰胺单核酸的产率，为烟酰胺单核苷酸生产提供了一种新的可纯化的、催化活性高、高效率的工程酶。
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