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公开(公告)号：CN118853725A
公开(公告)日：2024-10-29
申请号：CN202411088916.7
申请日：2024-08-09
申请人： 天津大学
摘要： 本发明公开了基于逻辑门基因电路的生物封存工程菌株构建方法，包括：步骤S1，设计逻辑门基因线路；步骤S2，根据设计的逻辑门基因线路，构建受温度调控的基因线路模块，即重组质粒PITN和重组质粒PICI；步骤S3，通过得到的重组质粒PITN和重组质粒PICI构建低温致死生物封存工程菌株PI6S。本发明能够实现工程菌株在实验室条件下正常生长，在自然水体中死亡的生物封存效果。
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公开(公告)号：CN118185975A
公开(公告)日：2024-06-14
申请号：CN202410545448.5
申请日：2024-05-06
申请人： 天津大学
摘要： 本发明公开了一种光驱合成蔗糖和肉桂酸的聚球藻7942工程菌的构建方法，包括：步骤S1，以质粒pUC‑tho为模板扩增得到Ptho；步骤S2，以集胞藻6803基因组为模板扩增得到Pcpc560；步骤S3，以质粒pUC‑PAL为模板扩增得到pal；步骤S4，以质粒pUC‑cscB为模板扩增得到cscB；步骤S5，以整合型质粒Pcp3031为模板扩增得到Trbcl；步骤S6，将Pcpc560、pal、Trbcl进行融合，并与表达载体pSI‑SPE进行连接，将形成的重组表达载体转入聚球藻7942中，得到可生产反式肉桂酸的菌株7942‑PAL；步骤S7，将Ptho、cscB、Trbcl进行融合，并与表达载体pSⅡ‑CM进行连接，形成的重组表达载体转入可生产反式肉桂酸的菌株7942‑PAL中，得到光驱合成蔗糖和反式肉桂酸的菌株7942‑CP。能够仅依靠光照和CO2，就能实现蔗糖和反式肉桂酸的同时生物合成。
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公开(公告)号：CN111041038A
公开(公告)日：2020-04-21
申请号：CN201911215898.3
申请日：2019-12-02
申请人： 天津大学
摘要： 本发明公开了高效生物合成虾青素的集胞藻6803基因工程菌及构建方法及应用，构建方法为：扩增CrtWD和CrtZA基因；将pTZD与CrtWD基因构建pTZD-WD；将pBA3031M与CrtZA基因构建pBA3031M-ZA；并依次转入集胞藻6803中，得到工程菌WD-ZA；扩增FBS基因，将pJAK与FBS构建pJAK-FBS转入工程菌WD-ZA中，得到WD-ZA-FBS；扩增基因dxs-E和基因ispA-E，构建操纵子片段dxs-RBS-ispA，将p0168与dxs-RBS-ispA片段构建p0168-DI转入菌株WD-ZA-FBS中，本发明的工程菌最终虾青素的产量达29.6mg/g。
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公开(公告)号：CN118531035A
公开(公告)日：2024-08-23
申请号：CN202410695436.0
申请日：2024-05-31
申请人： 天津大学
摘要： 本发明公开了一种三菌人工光合混菌系统的构建方法，包括：步骤S1，将Ptho、cscB、Trbcl进行融合，并与pSI‑SPE进行连接，将形成的重组表达载体1；步骤S2，将Pcpc560、pal、Trbcl进行融合，并与pSI‑SPE进行连接，形成的重组表达载体2；步骤S3，通过重组表达载体1和重组表达载体2分别得到蔗糖分泌菌株7942‑cscB与反式肉桂酸生产菌株7942‑PAL；步骤S4，将基因catB上下游同源臂片段进行融合，基因phdR上下游同源臂片段进行融合，并分别与pk18mobrpsl进行连接，得到重组表达载体3和重组表达载体4；步骤S5，通过重组表达载体3和重组表达载体4得到顺式粘康酸生产菌株Cgb‑CP。仅依靠光照和CO2，不需要额外添加有机碳源进行顺式粘康酸的生物合成。
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公开(公告)号：CN118185976A
公开(公告)日：2024-06-14
申请号：CN202410559221.6
申请日：2024-05-08
申请人： 天津大学
IPC分类号： C12N15/74 , C12N15/113 , C12N15/31 , C12N15/60 , C12N15/77 , C12P19/12 , C12P7/40 , C12P7/44 , C12R1/01 , C12R1/15
摘要： 本发明公开了一种三菌人工光合混菌系统的构建方法，包括：步骤S1，将Ptho、cscB、Trbcl进行融合，并与pSI‑SPE进行连接，将形成的重组表达载体1；步骤S2，将Pcpc560、pal、Trbcl进行融合，并与pSI‑SPE进行连接，形成的重组表达载体2；步骤S3，通过重组表达载体1和重组表达载体2分别得到蔗糖分泌菌株7942‑cscB与反式肉桂酸生产菌株7942‑PAL；步骤S4，将基因catB上下游同源臂片段进行融合，基因phdR上下游同源臂片段进行融合，并分别与pk18mobrpsl进行连接，得到重组表达载体3和重组表达载体4；步骤S5，通过重组表达载体3和重组表达载体4得到顺式粘康酸生产菌株Cgb‑CP。仅依靠光照和CO2，不需要额外添加有机碳源进行顺式粘康酸的生物合成。
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公开(公告)号：CN117004634A
公开(公告)日：2023-11-07
申请号：CN202310482311.5
申请日：2023-04-30
申请人： 天津大学
摘要： 本发明公开了适用于模式蓝细菌聚球藻PCC 7942的生物防逃逸系统及构建方法和应用，构建：构建质粒NSⅢ‑PR‑ssr1114‑TrrnB‑PpsbA2‑cI857‑Trbcl和质粒pJA‑Pcpc560‑slr0664‑TrrnB；将质粒NSⅢ‑PR‑ssr1114‑TrrnB‑PpsbA2‑cI857‑Trbcl转入聚球藻PCC 7942中，得到工程菌株MJJ‑01；将质粒pJA‑Pcpc560‑slr0664‑TrrnB转入工程菌株MJJ‑01中，得到生物防逃逸系统，实验证明，在低于33℃温度条件下，防逃逸菌株可启动“杀死开关”而快速死亡，并可应用于生产3‑HP的代谢工程蓝细菌菌株中。
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公开(公告)号：CN111041038B
公开(公告)日：2022-11-08
申请号：CN201911215898.3
申请日：2019-12-02
申请人： 天津大学
摘要： 本发明公开了高效生物合成虾青素的集胞藻6803基因工程菌及构建方法及应用，构建方法为：扩增CrtWD和CrtZA基因；将pTZD与CrtWD基因构建pTZD‑WD；将pBA3031M与CrtZA基因构建pBA3031M‑ZA；并依次转入集胞藻6803中，得到工程菌WD‑ZA；扩增FBS基因，将pJAK与FBS构建pJAK‑FBS转入工程菌WD‑ZA中，得到WD‑ZA‑FBS；扩增基因dxs‑E和基因ispA‑E，构建操纵子片段dxs‑RBS‑ispA，将p0168与dxs‑RBS‑ispA片段构建p0168‑DI转入菌株WD‑ZA‑FBS中，本发明的工程菌最终虾青素的产量达29.6mg/g。
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公开(公告)号：CN110438053B
公开(公告)日：2022-03-11
申请号：CN201910668051.4
申请日：2019-07-23
申请人： 天津大学
摘要： 本发明公开了一种适用于聚球藻的生物封存系统、构建方法及应用，构建为：从聚球藻7942中获得毒性基因sepT2、抗毒基因sepA2及缺铁诱导启动子PisiAB，从集胞藻6803中获得启动子PpsbA2；从整合型质粒pBA3031中扩增得到终止子Trbcl；以pBR322为载体，用缺铁诱导启动子PisiAB表达毒性基因sepT2，用终止子Trbcl终止转录；用启动子PpsbA2表达抗毒基因sepA2，构建质粒并转入聚球藻。本发明的系统，在非诱导情况下正常生长，诱导后迅速死亡。这对聚球藻的生物封存系统发展与优化具有重要的理论及实际意义，也为解决其它蓝细菌的生物安全问题提供了借鉴。
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公开(公告)号：CN118531036A
公开(公告)日：2024-08-23
申请号：CN202410695634.7
申请日：2024-05-31
申请人： 天津大学
摘要： 本发明公开了一种光驱合成蔗糖和肉桂酸的聚球藻7942工程菌的构建方法，包括：步骤S1，以质粒pUC‑tho为模板扩增得到Ptho；步骤S2，以集胞藻6803基因组为模板扩增得到Pcpc560；步骤S3，以质粒pUC‑PAL为模板扩增得到pal；步骤S4，以质粒pUC‑cscB为模板扩增得到cscB；步骤S5，以整合型质粒Pcp3031为模板扩增得到Trbcl；步骤S6，将Pcpc560、pal、Trbcl进行融合，并与表达载体pSI‑SPE进行连接，将形成的重组表达载体转入聚球藻7942中，得到可生产反式肉桂酸的菌株7942‑PAL；步骤S7，将Ptho、cscB、Trbcl进行融合，并与表达载体pSⅡ‑CM进行连接，形成的重组表达载体转入可生产反式肉桂酸的菌株7942‑PAL中，得到光驱合成蔗糖和反式肉桂酸的菌株7942‑CP。能够仅依靠光照和CO2，就能实现蔗糖和反式肉桂酸的同时生物合成。
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公开(公告)号：CN118497903A
公开(公告)日：2024-08-16
申请号：CN202410710857.6
申请日：2024-06-04
申请人： 天津大学
IPC分类号： C40B50/06 , C12N15/70 , C12N15/74 , C12N15/65 , C12N15/55 , C12N15/113 , C12N15/10 , C12R1/19 , C12R1/01
摘要： 本发明公开了一种蓝细菌多基因RBS文库构建方法，包括：步骤S1，构建基础质粒；步骤S2，构建编辑质粒；步骤S3，构建编辑靶标质粒；步骤S4，将编辑质粒和编辑靶标质粒共同转入大肠杆菌中，在LB培养基中加入1μg/mL的脱水四环素黑暗条件下诱导48小时，完成初级RBS文库的构建；步骤S5，将构建好的初级RBS文库转入至蓝细菌中，完成RBS文库的构建，并对RBS文库进行验证。本发明促进了蓝细菌代谢工程的发展，并为蓝细菌中特殊基因的转入及相关研究提供解决方案。
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