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公开(公告)号：CN1292011C
公开(公告)日：2006-12-27
申请号：CN200410072351.X
申请日：2004-10-21
申请人： 天津大学
IPC分类号： C08F299/00 , C12N15/66
摘要： 本发明公开了一种温敏壳聚糖-接枝-异丙基丙烯酰胺/月桂酸乙烯酯共聚物转基因载体的制备方法。该方法过程：以异丙基丙烯酰胺与月桂酸乙烯酯共聚合成温敏性共聚物，将分子量1000-7000，脱乙酰度80-95%的壳聚糖与共聚物偶联，形成壳聚糖-接枝-异丙基丙烯酰胺/月桂酸乙烯酯共聚物，精制后得到载体；该载体及含有β半乳糖苷酶报告基因的质粒DNA分别溶于醋酸/醋酸钠的溶液中，静置后，再把溶液按载体与DNA不同电荷比形成粒径50-120nm的复合物微粒。本发明采用的载体亲疏水性可调，相转变温度低于37℃，无细胞毒性，在较低的电荷比下能与质粒DNA复合，并能抗核酸酶对DNA的降解，在相同的条件下转染率高于壳聚糖，且借助温度的变化可控制基因的表达。
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公开(公告)号：CN1386548A
公开(公告)日：2002-12-25
申请号：CN02121066.7
申请日：2002-05-31
申请人： 天津大学
摘要： 本发明公开了一种烷基化壳聚糖转基因复合物微粒的制备方法。该方法包括烷基化壳聚糖的制备,及以其为载体与质粒DNA复合制备微粒,其特征在于:以分子量40000－50000,脱乙酰度90%以上的壳聚糖分散在氢氧化钠和异丙醇混合溶剂中,并向该溶液中加入烷基化试剂反应,经洗涤等处理得到取代度达20－30%的烷基化壳聚糖,将烷基化壳聚糖及含有CAT报告基因的质粒DNA分别溶于醋酸/醋酸钠的溶液中,静置后,再把它们的溶液按壳聚糖的氨基摩尔数与DNA的磷酸酯基摩尔数比进行混合,静置过滤得到粒径80－100nm的复合物微粒。本发明采用的载体亲疏水性可调,无细胞毒性,在较低的电荷比下能与质粒DNA复合,并能抗核酸酶对DNA的降解,在相同的条件下转染率接近质子转染胺(lipofectamine)水平。
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公开(公告)号：CN1844170A
公开(公告)日：2006-10-11
申请号：CN200610013520.1
申请日：2006-04-24
申请人： 天津大学
IPC分类号： C08F120/56 , C08F301/00 , C12N15/63 , A61K47/32 , A61K48/00
摘要： 本发明公开了一种温度敏感性聚异丙基丙烯酰胺－聚精氨酸缀合物的制备方法，属于温度敏感性转基因载体的制备技术。该方法过程包括将异丙基丙烯酰胺溶解于四氢呋喃中，加入引发剂4，4－偶氮双(4－氰基戊酸)，水浴加热，在氮气保护下反应，洗涤产物，去离子水溶解产物，透析冻干得到羧基封端的聚异丙基丙烯酰胺；羧基封端的聚异丙基丙烯酰胺溶解于盐酸/N，N，N′，N′四甲基乙二胺缓冲溶液中，加入聚精氨酸，再加入碳二亚胺，搅拌反应，不同温度离心分离，冷冻干燥得到聚异丙基丙烯酰胺－聚精氨酸缀合物产物。本发明的优点在于制备方法简单，合成条件温和，所制得的产物用于转基因载体，可实现对于DNA运输和表达的调控。
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公开(公告)号：CN100363392C
公开(公告)日：2008-01-23
申请号：CN200610013520.1
申请日：2006-04-24
申请人： 天津大学
IPC分类号： C08F120/56 , C08F301/00 , C12N15/63 , A61K47/32 , A61K48/00
摘要： 本发明公开了一种温度敏感性聚异丙基丙烯酰胺-聚精氨酸缀合物的制备方法，属于温度敏感性转基因载体的制备技术。该方法过程包括将异丙基丙烯酰胺溶解于四氢呋喃中，加入引发剂4，4′-偶氮双(4-氰基戊酸)，水浴加热，在氮气保护下反应，洗涤产物，去离子水溶解产物，透析冻干得到羧基封端的聚异丙基丙烯酰胺；羧基封端的聚异丙基丙烯酰胺溶解于盐酸/N，N，N′，N′四甲基乙二胺缓冲溶液中，加入聚精氨酸，再加入碳二亚胺，搅拌反应，不同温度离心分离，冷冻干燥得到聚异丙基丙烯酰胺-聚精氨酸缀合物产物。本发明的优点在于制备方法简单，合成条件温和，所制得的产物用于转基因载体，可实现对于DNA运输和表达的调控。
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公开(公告)号：CN1629203A
公开(公告)日：2005-06-22
申请号：CN200410072351.X
申请日：2004-10-21
申请人： 天津大学
IPC分类号： C08F299/00 , C12N15/66
摘要： 本发明公开了一种温敏壳聚糖－接枝－异丙基丙烯酰胺/月桂酸乙烯酯共聚物转基因载体的制备方法。该方法过程：以异丙基丙烯酰胺与月桂酸乙烯酯共聚合成温敏性共聚物，将分子量1000－7000，脱乙酰度80－95％的壳聚糖与共聚物偶联，形成壳聚糖－接枝－异丙基丙烯酰胺/月桂酸乙烯酯共聚物，精制后得到载体；该载体及含有β半乳糖苷酶报告基因的质粒DNA分别溶于醋酸/醋酸钠的溶液中，静置后，再把溶液按载体与DNA不同电荷比形成粒径50－120nm的复合物微粒。本发明采用的载体亲疏水性可调，相转变温度低于37℃，无细胞毒性，在较低的电荷比下能与质粒DNA复合，并能抗核酸酶对DNA的降解，在相同的条件下转染率高于壳聚糖，且借助温度的变化可控制基因的表达。
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公开(公告)号：CN1167468C
公开(公告)日：2004-09-22
申请号：CN02121066.7
申请日：2002-05-31
申请人： 天津大学
摘要： 本发明公开了一种烷基化壳聚糖转基因复合物微粒的制备方法。该方法包括烷基化壳聚糖的制备，及以其为载体与质粒DNA复合制备微粒，其特征在于：以分子量40000-50000，脱乙酰度90%以上的壳聚糖分散在氢氧化钠和异丙醇混合溶剂中，并向该溶液中加入烷基化试剂反应，经洗涤等处理得到取代度达20-30%的烷基化壳聚糖，将烷基化壳聚糖及含有CAT报告基因的质粒DNA分别溶于醋酸/醋酸钠的溶液中，静置后，再把它们的溶液按壳聚糖的氨基摩尔数与DNA的磷酸酯基摩尔数比进行混合，静置过滤得到粒径80-100nm的复合物微粒。本发明采用的载体亲疏水性可调，无细胞毒性，在较低的电荷比下能与质粒DNA复合，并能抗核酸酶对DNA的降解，在相同的条件下转染率接近脂质转染胺(lipofectamine)水平。
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