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公开(公告)号：CN118307651B
公开(公告)日：2025-03-21
申请号：CN202211728199.0
申请日：2022-12-29
Applicant: 山东农业大学
IPC: C07K14/415 , C12N15/29 , C12N15/82 , A01H5/00 , A01H6/82
Abstract: 本发明公开了一种抗病基因突变体及其在防治番茄褐色皱果病毒病中的应用，属于生物技术领域。本发明首次发现，将番茄Tm‑22基因的编码区序列中，第138位核苷酸由A突变为G，第418位核苷酸由T突变为C，第1425位核苷酸由A突变为G；或者，将番茄Tm‑22基因编码蛋白的第140位氨基酸由半胱氨酸突变为精氨酸，能够显著降低ToBRFV衣壳蛋白(CP)的积累，可作为新的ToBRFV抗性基因，对于ToBRFV的防治具有十分重要的意义。
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公开(公告)号：CN117586368A
公开(公告)日：2024-02-23
申请号：CN202311561555.9
申请日：2023-11-21
Applicant: 山东农业大学
Abstract: 本发明公开了eIF4E突变体在提高植物对马铃薯Y病毒属病毒抗性中的应用，属于植物基因工程技术领域。本发明通过分析携带PRSV‑W隐性抗病基因prv的西瓜品种PI 244019，发现eIF4E帽子结合口袋中D71G突变是决定PI 244019抗PRSV‑W的关键因素。通过比较多种植物eIF4E氨基酸，发现该位点在植物eIF4E中保守，且普通烟eIF4E的帽子结合口袋中的“D”突变为“G”也会引起对PVY的抗性，由此推断eIF4E帽子结合口袋中的“D”是决定植物对马铃薯Y病毒属病毒易感性的关键氨基酸位点。本发明证实植物eIF4E氨基酸位点对马铃薯Y病毒属抗性影响显著，利用eIF4E帽子结合口袋中保守氨基酸突变，后续有助于植物抗病品种的选育、构建与利用。
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公开(公告)号：CN116064412A
公开(公告)日：2023-05-05
申请号：CN202210789956.9
申请日：2022-07-06
Applicant: 山东农业大学
Abstract: 本发明公开了一种烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus，TMV)双位点突变弱毒疫苗及其应用，属于植物基因工程技术领域。本发明筛选到p126复制酶中4个调控TMV致病力的位点；为了进一步降低含有单个突变位点的弱毒株系发生回复突变恢复病毒致病力的概率，本发明通过将筛选到的4个调控病毒致病力的位点分别两两组合，获得了1个致病力显著下降的TMV双位点弱毒突变体TMV‑E614G‑S643F；该TMV双位点弱毒突变体TMV‑E614G‑S643F能够在植物体内稳定遗传，对野生型TMV有良好的交叉保护效果。
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公开(公告)号：CN114854785A
公开(公告)日：2022-08-05
申请号：CN202110160758.1
申请日：2021-02-05
Applicant: 山东农业大学
Abstract: 本发明属于植物抗病毒基因工程领域，公开了一种抗病毒马铃薯植株的制备方法及其应用。制备方法包括：(1)以pHSE401为骨架，构建载体，以在StPCaP1基因的第762位至第781位核苷酸引入插入、缺失或替换突变；(2)将获得的载体转化农杆菌，将筛选出的农杆菌阳性转化子利用农杆菌介导的叶盘转化法转化马铃薯，筛选StPCaP1基因敲除的马铃薯植株；(3)摩擦接种马铃薯病毒至StPCaP1基因敲除的马铃薯植株，检测其抗病毒能力，得到抗病毒马铃薯植株。采用本发明的制备方法制备得到的抗病毒马铃薯植株，能够明显抑制马铃薯病毒，尤其是马铃薯Y病毒的侵染，显著减轻植物受马铃薯Y病毒感染后的伤害，能够显著减少损失。
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公开(公告)号：CN108203715B
公开(公告)日：2021-08-03
申请号：CN201710598414.2
申请日：2017-07-21
Applicant: 山东农业大学
Abstract: 本发明涉及植物病毒基因工程领域，提供了一种番木瓜环斑病毒西瓜株系超表达载体的构建技术及应用。通过基因插入重组的方式，将番木瓜环斑病毒西瓜株系山东分离物PRSV‑SD的基因组克隆到35S启动子下游，获得侵染性克隆pCamPRSV；在此基础上，将GFP基因插入pCamPRSV的NIb基因和CP基因之间，构建了能够表达外源GFP基因的超表达载体pCamPRSV‑GFP。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110885796A
公开(公告)日：2020-03-17
申请号：CN201810948236.6
申请日：2018-08-20
Applicant: 山东农业大学 , 中国烟草总公司黑龙江省公司牡丹江烟草科学研究所
Abstract: 本发明涉及植物抗病毒基因工程领域，公开了一种抗马铃薯X病毒的弱毒疫苗、制备方法及其应用。抗马铃薯X病毒的弱毒疫苗以TVBMV弱毒突变体为基础，TVBMV弱毒突变体中嵌入了可诱导对马铃薯X病毒产生交叉保护的有效基因片段，所述的有效基因片段至少包括马铃薯X病毒的RdRp基因。所述的RdRp基因包括Rd1基因、Rd2基因和Rd3基因，所述的TVBMV弱毒突变体中嵌入Rd1基因、Rd2基因和Rd3基因中的一种。本发明的抗马铃薯X病毒的弱毒疫苗作用稳定，可以起到有效的交叉保护作用，显著减轻植物受马铃薯X病毒强毒株系感染后的伤害，延迟植物发病，大大减少损失。
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公开(公告)号：CN110856493A
公开(公告)日：2020-03-03
申请号：CN201810948204.6
申请日：2018-08-20
Applicant: 中国烟草总公司黑龙江省公司牡丹江烟草科学研究所 , 山东农业大学
Abstract: 本发明涉及农业科学领域，公开了一种植物病毒弱毒疫苗组合物、弱毒疫苗保存方法及其应用。植物病毒弱毒疫苗组合物包括携带植物病毒弱毒疫苗的发酵菌体、轻质碳酸钙、黄腐酸和黄原胶。携带植物病毒弱毒疫苗的发酵菌体与轻质碳酸钙的体积比为1:1。黄腐酸和黄原胶的添加量与发酵菌体和轻质碳酸钙混合物的关系为：每10ml发酵菌体和轻质碳酸钙混合物中加入50mg黄腐酸和50mg黄原胶。本发明的组合物和方法可以延长弱毒疫苗的保存时间，提高货架期，有利于弱毒疫苗的广泛应用，可以大大减少损失。
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公开(公告)号：CN109777826A
公开(公告)日：2019-05-21
申请号：CN201910131610.8
申请日：2019-02-22
Applicant: 山东农业大学
Abstract: 本发明公开了小西葫芦黄花叶病毒侵染性克隆表达载体，该侵染性克隆表达载体是由小西葫芦黄花叶病毒全基因组通过同源重组的方式克隆到含有花椰菜花叶病毒35S启动子的pCambia0390双元载体上制备得到；所述小西葫芦黄花叶病毒侵染性克隆表达载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。本发明构建得到能通过农杆菌浸润方法接种并稳定高效侵染甜瓜、西葫芦等寄主植物的小西葫芦黄花叶病毒侵染性克隆，该侵染性克隆同时还能高效表达外源蛋白。
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公开(公告)号：CN105132421B
公开(公告)日：2018-12-25
申请号：CN201510631937.3
申请日：2015-09-29
Applicant: 山东农业大学
Abstract: 本发明公开了一种同时检测番茄黄化曲叶病毒及伴随的越南番茄黄化曲叶卫星DNAβ的方法及其专用引物组。本发明提供的引物组，由引物对TY和引物对β组成；所述引物对TY由名称为TY‑F的引物和名称为TY‑R的引物组成；所述TY‑F为序列表中序列1所示的单链DNA；所述TY‑R为序列表中序列2所示的单链DNA；所述引物对β由名称为β‑F的引物和名称为β‑R的引物组成；所述β‑F为序列表中序列4所示的单链DNA；所述β‑R为序列表中序列5所示的单链DNA。实验证明，本发明提供的方法可准确的检测番茄黄化曲叶病毒和/或越南卫星DNAβ。
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公开(公告)号：CN118772252B
公开(公告)日：2025-02-14
申请号：CN202410372776.X
申请日：2024-03-29
Applicant: 山东农业大学
IPC: C07K14/415 , C12N15/29 , C12N15/84 , A01H5/00 , A01H6/82
Abstract: 本发明公开了一种抗番茄褐色皱果病毒的突变体及其应用，属于病毒病生物防治技术领域。本发明通过随机突变发现Tm‑22的LRR结构域的第767位酪氨酸突变为苯丙氨酸对ToBRFV具有微弱抗性，进一步通过定点饱和突变的方法将Tm‑22基因编码蛋白的第767位酪氨酸突变为其他18种氨基酸，获得18个Tm‑22突变体质粒，结果发现，第767位酪氨酸突变为色氨酸产生的突变体Tm‑22‑Mut3‑1对ToBRFV的抗性最强，同时保留了对TMV、ToMV和ToMMV的抗性。将Tm‑22‑Mut3‑1的LRR结构域第767位酪氨酸突变为苯丙氨酸和前期研究得到的突变体Tm‑22‑Mut2的NB‑ARC结构域第354位异亮氨酸突变为甲硫氨酸进行组合突变，获得突变体Tm‑22‑Mut4，结果发现Tm‑22‑Mut4能够显著降低ToBRFV衣壳蛋白的积累，与突变体pFGCTm‑22‑Mut2以及新获得的突变体Tm‑22‑Mut3‑1相比，其对于ToBRFV的抗性有显著提高。
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