公开(公告)号：CN117844850A

公开(公告)日：2024-04-09

申请号：CN202311780446.6

申请日：2023-12-22

申请人： 山东省林草种质资源中心(山东省药乡林场)

发明人： 王艳 ,  鲁仪增 ,  关凌珊 ,  穆艳娟 ,  孙涛 ,  张鹏飞 ,  解孝满 ,  姜春君 ,  赵云朝 ,  仝伯强 ,  赵勇 ,  朱娜娜 ,  厉锋 ,  王睿龙

IPC分类号： C12N15/82 ,  C12N15/29 ,  A01H5/00 ,  A01H6/00 ,  C12Q1/6895

摘要： 本发明提供农杆菌介导的五莲杨遗传转化方法及其检测方法，所述遗传转化方法，包括如下步骤：(1)以成熟叶片中间部分为外植体，置于添加乙酰丁香酮的农杆菌重悬液中侵染，得到侵染样本；(2)侵染后的叶片放入共培养基中进行暗培养，共培养结束后按照“3‑3‑7‑3”方式进行不定芽筛选培养；4)将步骤(3)得到的筛选抗性芽转入生根筛选固体培养基中继续培养35d。检测方法为双筛法，抗性生根苗炼苗移栽自然光下培养30d后，分别进行DNA和RNA水平检验，确定基因的稳定性转化。本发明首次以五莲杨叶片中间部位为外植体进行农杆菌侵染的直接器官发生方式建立高效遗传转化体系，诱导五莲杨叶片产生较多数量的不定芽，提高阳性转化率和阳性植株鉴定效率。