公开(公告)号：CN102851301B

公开(公告)日：2014-09-10

申请号：CN201210173714.3

申请日：2012-07-06

申请人： 广东大华农动物保健品股份有限公司 ,  肇庆大华农生物药品有限公司

发明人： 何玲 ,  唐满华 ,  陈瑞爱 ,  梁珪益

IPC分类号： C12N15/50 ,  C12N15/10

摘要： 本发明提供了一种猪流行性腹泻病毒M基因全序列的扩增方法，包括如下具体步骤：1、提取猪流行性腹泻病毒RNA；2、依据猪流行性腹泻病毒（PEDV）的M基因序列设计RT-PCR引物，并扩增猪流行性腹泻病毒（PEDV）的M基因；3、依据猪流行性腹泻病毒（PEDV）的M基因序列设计套式PCR引物，以RT-PCR产物为模板，扩增M基因全部片段；4、PCR产物的克隆及测序分析：将套式PCR产物进行纯化并连接到pMD18-TSimpleVector上，筛选阳性克隆，将阳性克隆进行测序鉴定。该方法能够扩增猪流行性腹泻病毒（PEDV）的M基因全长，通过该方法可以捕捉到猪流行性腹泻病毒在细胞培养传代过程中M全基因的序列变化，从而通过M基因的遗传变异分析了解其与PEDV毒力或者免疫效力的相关性。

公开(公告)号：CN102851301A

公开(公告)日：2013-01-02

申请号：CN201210173714.3

申请日：2012-07-06

申请人： 广东大华农动物保健品股份有限公司 ,  肇庆大华农生物药品有限公司

发明人： 何玲 ,  唐满华 ,  陈瑞爱 ,  梁珪益

IPC分类号： C12N15/50 ,  C12N15/10

摘要： 本发明提供了一种猪流行性腹泻病毒M基因全序列的扩增方法，包括如下具体步骤：1、提取猪流行性腹泻病毒RNA；2、依据猪流行性腹泻病毒（PEDV）的M基因序列设计RT-PCR引物，并扩增猪流行性腹泻病毒（PEDV）的M基因；3、依据猪流行性腹泻病毒（PEDV）的M基因序列设计套式PCR引物，以RT-PCR产物为模板，扩增M基因全部片段；4、PCR产物的克隆及测序分析：将套式PCR产物进行纯化并连接到pMD18-TSimpleVector上，筛选阳性克隆，将阳性克隆进行测序鉴定。该方法能够扩增猪流行性腹泻病毒（PEDV）的M基因全长，通过该方法可以捕捉到猪流行性腹泻病毒在细胞培养传代过程中M全基因的序列变化，从而通过M基因的遗传变异分析了解其与PEDV毒力或者免疫效力的相关性。