公开(公告)号：CN110358723A

公开(公告)日：2019-10-22

申请号：CN201910382453.8

申请日：2019-05-08

申请人： 广州医科大学附属第二医院

发明人： 刘世明 ,  刘宁宁 ,  顾杰蕾 ,  周文怡 ,  徐如芹

IPC分类号： C12N5/071

摘要： 本发明公开了一种成年小鼠心脏成纤维细胞的培养方法，包括步骤：取SPF级8～12周龄的小鼠，颈椎脱臼后杀菌；取出小鼠的心脏，放入盛有预冷无钙HBSS的培养皿中，挤出心脏中残留的血液，去除心脏心房、左右心耳、心包膜，保留心室，转移到新的盛有预冷无钙HBSS的培养皿中，将心脏剪碎，转移至离心管中，待心脏组织沉淀后，将HBSS用移液器吸出；离心管中加入胶原酶消化液消化，然后重悬获得细胞悬液；铺板至第一培养皿中，静置培养；然后重悬细胞、离心弃上清，用培养基重悬细胞铺板至第二培养皿中，原有的第一培养皿加入新的培养基，即得。该培养方法简单易行，稳定性好，重复性高，形态均一，所得成纤维细胞生长良好。

公开(公告)号：CN109593709A

公开(公告)日：2019-04-09

申请号：CN201811048280.8

申请日：2018-09-07

申请人： 广州医科大学附属第二医院

发明人： 刘世明 ,  刘宁宁 ,  徐如芹 ,  刘彬 ,  张方程

IPC分类号： C12N5/0775

摘要： 本发明公开了一种原代间充质干细胞的提取、培养和传代培养方法，其中主要包括：在原代培养时，延长首次换液的时间到72h，采用完全换液方法，之后每2～3天完全换液一次，保证原代大鼠骨髓间充质干细胞的营养支持；培养至第7～10天镜下可见大量的集落形成，根据集落细胞的长势来决定首次传代的时间，不必等到细胞融合度达到80～90％再传代；在原代间充质干细胞传代培养的过程中，降低胰酶消化液的浓度，减少胰酶消化液用量，缩短胰酶消化接触时间。本发明在保证原代细胞分离培养纯度的条件下，简化了原代细胞分离培养方法，缩短了原代培养时间，通过调整胰酶消化浓度、用量、时间，最大程度地保留了细胞生长活力。