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公开(公告)号：CN115980344A
公开(公告)日：2023-04-18
申请号：CN202210805714.4
申请日：2022-07-08
申请人： 扬州大学
IPC分类号： G01N33/569 , G01N33/58 , C07K14/08 , C12N15/866 , C12N15/40 , C07K1/22
摘要： 本发明涉及一种基于昆虫细胞表达产物的检测新型鹅星状病毒抗体的ELISA试剂盒，本发明的原理是将表达新型GAstV的ORF2重组蛋白的杆状病毒感染Sf9细胞，并以镍柱亲和层析法纯化感染细胞裂解液上清中的ORF2重组蛋白，将纯化的重组蛋白分别作为包被抗原组装检测新型GAstV抗体的间接ELISA试剂盒。研究结果表明，建立的检测新型GAstV抗体的间接ELISA试剂盒具有良好的特异性和灵敏性，在新型GAstV病毒流行病学调查中具有良好的应用价值。
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公开(公告)号：CN114457115A
公开(公告)日：2022-05-10
申请号：CN202210220996.1
申请日：2022-03-08
申请人： 扬州大学
IPC分类号： C12N15/866 , C12N15/40 , C12N7/01
摘要： 本发明涉及一种表达新型鹅星状病毒衣壳蛋白ORF2的重组杆状病毒的构建方法，包括以下步骤：（1）构建GAstV‑ORF2基因重组杆状病毒表达载体：（2）表达重组GAstV‑ORF2蛋白的杆状病毒包装和传代：（3）将携带有GAstV‑ORF2基因的杆状病毒质粒转染进Sf9细胞，并在27℃无CO2培养箱中培养5‑7天，每天观察细胞病变情况；当细胞病变达到70%时收集细胞上清，放入‑80℃保存；进行病毒的传代，传至第3代时，作为种毒保存并扩大培养，得到表达新型鹅星状病毒衣壳蛋白ORF2的重组杆状病毒。本发明的原理是通过扩增鹅星状病毒衣壳蛋白ORF2全长片段，构建杆状病毒重组载体，转染Sf9细胞，获得能够表达衣壳蛋白ORF2的杆状病毒。
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公开(公告)号：CN109295010B
公开(公告)日：2021-04-02
申请号：CN201811178904.8
申请日：2018-10-10
申请人： 扬州大学
摘要： 本发明涉及一种利用鸡肝细胞进行坦布苏病毒高效扩增的方法，包括以下步骤：（1）细胞培养：将鸡肝细胞用含体积浓度为10%胎牛血清的DMEM‑F12培养基进行培养，待细胞长满单层后，用PBS洗涤一遍后，以质量浓度为0.25%的胰酶进行消化、传代至细胞培养板中；（2）鸡肝细胞高效扩增坦布苏病毒：将鸡肝细胞接种至细胞培养板内培养，在汇合度为60%到70%时，将坦布苏病毒AHRD2018株接种鸡肝细胞，MOI为0.01，以2ml含体积浓度为2%胎牛血清的培养基培养4天，定时收集200μl上清冻存于‑80℃冰箱备用，同时每孔补200μl含体积浓度为2%胎牛血清的培养基。本发明利用鸡肝细胞可以更早产生高滴度病毒的特性，利用病毒复制速率显著高于DF‑1细胞和BHK‑21细胞的鸡肝细胞来扩增坦布苏病毒。
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公开(公告)号：CN112881688A
公开(公告)日：2021-06-01
申请号：CN202110321454.9
申请日：2021-03-25
申请人： 扬州大学
IPC分类号： G01N33/569 , G01N33/533 , G01N33/577
摘要： 本发明涉及一种快速检测鹅星状病毒的免疫荧光方法，利用鸡肝细胞对鹅星状病毒感染的组织样品或者已经分离到的病毒进行培养，培养基为含1μg/mL TPCK‑胰蛋白酶的DMEM‑F12培养基，用针对鹅星状病毒P2蛋白的6C6单抗作为一抗，FITC标记的羊抗鼠IgG作为二抗进行IFA检测；或者直接取新鲜的组织进行冰冻切片，用针对鹅星状病毒P2蛋白的6C6单抗作为一抗，FITC标记的羊抗鼠IgG作为二抗进行IFA检测。所述一抗是杂交瘤细胞株6C6分泌的抗星状病毒P2蛋白单克隆抗体6C6制备而成。通过本发明，本发明的快速检测鹅星状病毒的免疫荧光技术可以特异性的检测鹅星状病毒，且阴性背景低，效果显著。
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公开(公告)号：CN112852756A
公开(公告)日：2021-05-28
申请号：CN202110321451.5
申请日：2021-03-25
申请人： 扬州大学
摘要： 本发明涉及一种利用鸡肝细胞快速分离扩增新型鹅星状病毒的方法，包括以下步骤：（1）利用鸡肝细胞对鹅星状病毒进行培养；（2）鸡肝细胞快速扩增鹅星状病毒，利用鸡肝细胞对鹅星状病毒进行培养扩增的培养基为含1μg/mL TPCK‑胰蛋白酶的DMEM‑F12培养基；（3）鸡肝细胞能扩增鹅星状病毒，第三天病毒效价可达1.08×106TCID50/ml。通过本发明，这种快速分离扩增方法的建立为快速病毒检测和疫苗的研制提供技术平台，节约时间、成本。因此，本发明在GAstV的病毒检测及疫苗研制中具有很好的应用价值。
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公开(公告)号：CN116426489A
公开(公告)日：2023-07-14
申请号：CN202310320468.8
申请日：2023-03-27
申请人： 扬州大学
IPC分类号： C12N7/01 , C12N15/861 , C12N15/40 , C12N15/65 , C12R1/93
摘要： 本发明涉及一种基于CRISPR‑Cas9技术的表达新型鹅星状病毒ORF2蛋白C端的重组血清4型禽腺病毒及其制备方法，所述新型鹅星状病毒GD毒株ORF2蛋白C端，其序列如SEQ ID NO.1所示。重组血清4型禽腺病毒，其中使用新型鹅星状病毒GD毒株ORF2蛋白C端替换FAdV‑4的Fiber‑2基因的253位核苷酸到1440位核苷酸，FAdV‑4的Fiber‑2基因序列如SEQ ID NO.2所示。通过本发明，利用当下流行的血清4型禽腺病毒作为载体插入新型鹅星状病毒ORF2蛋白C端，成功获得表达新型鹅星状病毒ORF2蛋白C端的重组血清4型禽腺病毒，为同时免疫防控血清4型禽腺病毒和新型鹅星状病毒提供了技术支撑与二联弱毒疫苗候选。
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公开(公告)号：CN115840044A
公开(公告)日：2023-03-24
申请号：CN202211251264.5
申请日：2022-10-13
申请人： 扬州大学
IPC分类号： G01N33/569 , G01N33/68 , G01N33/58 , G01N33/543
摘要： 本发明涉一种检测新型鹅星状病毒ORF2蛋白抗体的特异性多肽‑ELISA试剂盒及其方法，所述试剂盒包含包被GAstV独有特异性多肽的酶标板、阳性阴性对照、HRP标记的兔抗鸡二抗、样品稀释液、洗涤液、显色液以及终止液；所述包被的GAstV独有特异性多肽是根据GAstV线性B细胞抗原表位序列设计合成，具体的序列如下：CQTLTDPEEDDDPLSDVTSLFD。通过本发明，可以实现快速特异检测GAstV抗体。此试剂盒能用于大规模血清学检测和流行病学调查，在GAstV感染以及免疫检测中具有良好的应用和推广价值。
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公开(公告)号：CN109295010A
公开(公告)日：2019-02-01
申请号：CN201811178904.8
申请日：2018-10-10
申请人： 扬州大学
摘要： 本发明涉及一种利用鸡肝细胞进行坦布苏病毒高效扩增的方法，包括以下步骤：（1）细胞培养：将鸡肝细胞用含体积浓度为10%胎牛血清的DMEM-F12培养基进行培养，待细胞长满单层后，用PBS洗涤一遍后，以质量浓度为0.25%的胰酶进行消化、传代至细胞培养板中；（2）鸡肝细胞高效扩增坦布苏病毒：将鸡肝细胞接种至细胞培养板内培养，在汇合度为60%到70%时，将坦布苏病毒AHRD2018株接种鸡肝细胞，MOI为0.01，以2ml含体积浓度为2%胎牛血清的培养基培养4天，定时收集200μl上清冻存于-80℃冰箱备用，同时每孔补200μl含体积浓度为2%胎牛血清的培养基。本发明利用鸡肝细胞可以更早产生高滴度病毒的特性，利用病毒复制速率显著高于DF-1细胞和BHK-21细胞的鸡肝细胞来扩增坦布苏病毒。
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