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公开(公告)号：CN111440228B
公开(公告)日：2021-08-24
申请号：CN202010157367.X
申请日：2020-03-09
申请人： 扬州大学
IPC分类号： C07K14/11 , G01N33/569 , G01N33/68 , C07K16/10 , A61K39/145 , A61P31/16
摘要： 本发明涉及多种亚型流感病毒HA2蛋白共同抗原表位、抗体、鉴定方法和应用，该抗原表位能够与H1、H3、H4、H5、H6、H7、H8、H9和H10亚型流感病毒的免疫血清结合。选择一株H5N1亚型流感毒株S，根据其HA2蛋白的序列设计长度为20个氨基酸且互相重叠10个氨基酸的18条多肽，人工合成后点样至改性硅胶摸制成多肽芯片，使用针对不同亚型IAV的抗血清筛选通用表位。构建该表位突变的重组病毒，通过蛋白质印迹分析表位与免疫血清的结合能力。结果表明，HA2蛋白上485‑FYHKCDNECME‑495具有与H1，H3，H4，H5，H6，H7，H8，H9和H10亚型IAV抗血清的广谱结合活性。重组病毒中的K/D突变导致血清结合活性降低，表明它们是血清结合活性的关键氨基酸。该肽段还包含HLA‑DR1限制性CD4 T细胞表位。
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公开(公告)号：CN109402070A
公开(公告)日：2019-03-01
申请号：CN201811308245.5
申请日：2018-11-05
申请人： 扬州大学
摘要： 本发明提供了一种重组H7N9亚型禽流感病毒株、标记疫苗及其制备方法，属于动物疫苗技术领域。重组H7N9亚型禽流感病毒株，以H7N9亚型禽流感病毒JD/17病毒株为母本病毒株，用H3亚型的氨基酸序列替换所述JD/17病毒株的HA蛋白中氨基酸序列；所述H7N9亚型禽流感病毒JD/17病毒株的保藏编号为CCTCC NO.V201862。通过测定HA效价、EID50、TCID50，结果显示拯救的病毒株保持了母本病毒株相似的生物学特性，具有较高的HA效价和EID50，经灭活乳化后制备的标记疫苗免疫鸡群产生的抗体水平较高，且该抗体能与鸡自然感染H7N9亚型禽流感病毒后产生的抗体相区别。
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公开(公告)号：CN106811549B
公开(公告)日：2021-02-19
申请号：CN201710094558.4
申请日：2017-02-21
申请人： 扬州大学
摘要： 本发明提供了一种禽流感病毒NA亚型RT‑PCR单重检测引物组，以及禽流感病毒NA亚型RT‑PCR多重检测引物组与禽流感病毒NA亚型RT‑PCR多重检测试剂盒，其中禽流感病毒NA亚型RT‑PCR多重检测引物组包括3组禽流感病毒NA亚型RT‑PCR检测引物组，每组禽流感病毒NA亚型RT‑PCR检测引物组包括一对特异性引物对和一个荧光基团标记的探针。本发明建立的3个多重探针荧光定量组合RT‑PCR体系，每个体系中的各个成分互不干扰，且都能特异地检测出3个不同NA亚型。本发明只需要同时进行3个体系的荧光定量PCR，根据CT值就能直接判断出NA亚型，实验流程更加省时、方便，实验结果更加直观、可信。
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公开(公告)号：CN107449912B
公开(公告)日：2019-06-18
申请号：CN201710757257.5
申请日：2017-08-29
申请人： 扬州大学
IPC分类号： C07K14/11 , G01N33/569
摘要： 本发明提供了抗H7N9亚型禽流感病毒单克隆抗体抗原表位及其筛选方法和应用，属于免疫检测技术领域。所述筛选方法是将野生型H7N9亚型禽流感病毒液与具有中和特性的相应单克隆抗体混合孵育，接种至SPF鸡胚，得到血凝效价为阳性的尿囊液；将所述阳性尿囊液进行梯度稀释，再次与单克隆抗体混合孵育接种至SPF鸡胚中，选择血凝效价为阳性的尿囊液为抗原测定单克隆抗体的血凝抑制效价，当所述尿囊液测定的血凝抑制效价比野生型病毒测定的血凝抑制效价低8log2时，判定为H7N9亚型禽流感病毒突变逃逸株，测定其HA基因序列，确定单克隆抗体所识别的抗原表位。所述方法明确筛选出针对特定抗原表位，方法简单准确，筛选周期短。
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公开(公告)号：CN107449912A
公开(公告)日：2017-12-08
申请号：CN201710757257.5
申请日：2017-08-29
申请人： 扬州大学
IPC分类号： G01N33/569 , G01N33/577
CPC分类号： G01N33/56983 , G01N33/577
摘要： 本发明提供了抗H7N9亚型禽流感病毒单克隆抗体抗原表位及其筛选方法和应用，属于免疫检测技术领域。所述筛选方法是将野生型H7N9亚型禽流感病毒液与具有中和特性的相应单克隆抗体混合孵育，接种至SPF鸡胚，得到血凝效价为阳性的尿囊液；将所述阳性尿囊液进行梯度稀释，再次与单克隆抗体混合孵育接种至SPF鸡胚中，选择血凝效价为阳性的尿囊液为抗原测定单克隆抗体的血凝抑制效价，当所述尿囊液测定的血凝抑制效价比野生型病毒测定的血凝抑制效价低8log2时，判定为H7N9亚型禽流感病毒突变逃逸株，测定其HA基因序列，确定单克隆抗体所识别的抗原表位。所述方法明确筛选出针对特定抗原表位，方法简单准确，筛选周期短。
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公开(公告)号：CN106811549A
公开(公告)日：2017-06-09
申请号：CN201710094558.4
申请日：2017-02-21
申请人： 扬州大学
摘要： 本发明提供了一种禽流感病毒NA亚型RT‑PCR单重检测引物组，以及禽流感病毒NA亚型RT‑PCR多重检测引物组与禽流感病毒NA亚型RT‑PCR多重检测试剂盒，其中禽流感病毒NA亚型RT‑PCR多重检测引物组包括3组禽流感病毒NA亚型RT‑PCR检测引物组，每组禽流感病毒NA亚型RT‑PCR检测引物组包括一对特异性引物对和一个荧光基团标记的探针。本发明建立的3个多重探针荧光定量组合RT‑PCR体系，每个体系中的各个成分互不干扰，且都能特异地检测出3个不同NA亚型。本发明只需要同时进行3个体系的荧光定量PCR，根据CT值就能直接判断出NA亚型，实验流程更加省时、方便，实验结果更加直观、可信。
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公开(公告)号：CN109402070B
公开(公告)日：2020-07-31
申请号：CN201811308245.5
申请日：2018-11-05
申请人： 扬州大学
摘要： 本发明提供了一种重组H7N9亚型禽流感病毒株、标记疫苗及其制备方法，属于动物疫苗技术领域。重组H7N9亚型禽流感病毒株，以H7N9亚型禽流感病毒JD/17病毒株为母本病毒株，用H3亚型的氨基酸序列替换所述JD/17病毒株的HA蛋白中氨基酸序列；所述H7N9亚型禽流感病毒JD/17病毒株的保藏编号为CCTCC NO.V201862。通过测定HA效价、EID50、TCID50，结果显示拯救的病毒株保持了母本病毒株相似的生物学特性，具有较高的HA效价和EID50，经灭活乳化后制备的标记疫苗免疫鸡群产生的抗体水平较高，且该抗体能与鸡自然感染H7N9亚型禽流感病毒后产生的抗体相区别。
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公开(公告)号：CN111154728A
公开(公告)日：2020-05-15
申请号：CN202010029846.3
申请日：2020-01-13
申请人： 扬州大学
IPC分类号： C12N5/20 , G01N33/577 , G01N33/569 , C07K16/10 , C12R1/91
摘要： 本发明属于免疫领域，涉及一种用于H7N9亚型禽流感病毒HA多肽竞争抑制ELISA抗体检测的单克隆抗体及方法。本发明公开了H7-12多肽抗体单克隆抗体杂交瘤细胞株3G10(CCTCC No：C2019150)及其在H7N9亚型禽流感病毒HA多肽的竞争抑制ELISA抗体检测中的应用。本发明利用筛选到的单抗3G10作为竞争抗体建立一种竞争抑制ELISA方法，用来检测H7N9病毒感染血清抗体；因为H7N9灭活标记疫苗所产生的抗体中没有针对H7-12的抗体，所以该方法又能作为标记疫苗配套的检测方法，用于区分临床上H7N9亚型AIV野毒感染血清和标记疫苗免疫血清，为H7N9亚型AIV的净化提供了技术支持。
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公开(公告)号：CN111440228A
公开(公告)日：2020-07-24
申请号：CN202010157367.X
申请日：2020-03-09
申请人： 扬州大学
IPC分类号： C07K14/11 , G01N33/569 , G01N33/68 , C07K16/10 , A61K39/145 , A61P31/16
摘要： 本发明涉及多种亚型流感病毒HA2蛋白共同抗原表位、抗体、鉴定方法和应用，该抗原表位能够与H1、H3、H4、H5、H6、H7、H8、H9和H10亚型流感病毒的免疫血清结合。选择一株H5N1亚型流感毒株S，根据其HA2蛋白的序列设计长度为20个氨基酸且互相重叠10个氨基酸的18条多肽，人工合成后点样至改性硅胶摸制成多肽芯片，使用针对不同亚型IAV的抗血清筛选通用表位。构建该表位突变的重组病毒，通过蛋白质印迹分析表位与免疫血清的结合能力。结果表明，HA2蛋白上485-FYHKCDNECME-495具有与H1，H3，H4，H5，H6，H7，H8，H9和H10亚型IAV抗血清的广谱结合活性。重组病毒中的K/D突变导致血清结合活性降低，表明它们是血清结合活性的关键氨基酸。该肽段还包含HLA-DR1限制性CD4 T细胞表位。
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