公开(公告)号：CN103275969A

公开(公告)日：2013-09-04

申请号：CN201310202937.2

申请日：2013-05-28

申请人： 武汉大学

发明人： 李阳 ,  李阳生 ,  卢楠 ,  李杨

IPC分类号： C12N15/10

摘要： 本发明公开了一种体外DNA序列修改方法，该方法通过设计合成针对修改位置的突变引物，该突变引物的一端具有识别位点和酶切位点不重合的限制性内切酶识别序列，用待修改的目标DNA做模板，扩增并酶切，该突变引物包括：保护碱基、酶切识别位点、酶切位点、模板识别退火位点、DNA编辑位点，所述DNA编辑位点位于粘末端位点内或者模板识别退火位点内。本发明与常规PCR点突变法相比更为高效，快捷简单的DNA序列修改方法，此方法不仅适用于DNA的点突变，更适合于更大DNA片段的插入，缺失，修改。实现本方法的策略主要使用PCR扩增，typeIIS限制性内切酶酶切和连接酶连接来实现，该方法简捷，高效，每次可以对DNA上的多个位点同时进行突变。

公开(公告)号：CN103255158A

公开(公告)日：2013-08-21

申请号：CN201310205161.X

申请日：2013-05-28

申请人： 武汉大学

发明人： 李阳 ,  李阳生 ,  卢楠 ,  李杨

IPC分类号： C12N15/66 ,  C12N15/63

摘要： 本发明公开了一种构建人工小RNA(amiRNA)表达载体的方法，其通过人工合成含有正向靶标-环部骨架-反向靶标的DNA，且此DNA片段两端含有预设的typeIIS内切酶酶切位点，将其克隆到含有此typeIIS限制性内切酶的含有amiRNA前体骨架的载体中得到小RNA(amiRNA)表达载体。该方法具有高效率、高通量的优点，而且操作简单，用此方法构建一个干扰载体只需要设计一对50bp左右的引物，1-2小时即可完成构建。