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公开(公告)号：CN113388585B
公开(公告)日：2024-05-14
申请号：CN202110650803.1
申请日：2021-06-10
申请人： 江苏农牧科技职业学院
摘要： 本发明提供一种T7噬菌体高滴度培养方法及其应用。本发明利用基因工程操作方法构建表达gene17.5串联gene19.5编码蛋白的重组大肠杆菌作为补偿宿主，再通过反向遗传方法在补偿宿主中拯救出gene17.5、gene19.5双基因缺失株噬菌体，双基因缺失T7噬菌体感染补偿宿主后在宿主内复制、富集，并在诱导gene17.5、19.5编码蛋白表达后裂解宿主。通过推迟宿主的裂解时间，增加噬菌体在宿主内的复制循环次数达到高滴度培养目的。
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公开(公告)号：CN113604481B
公开(公告)日：2023-05-02
申请号：CN202110770292.7
申请日：2021-07-07
申请人： 江苏农牧科技职业学院
摘要： 本发明属于基因工程技术领域，涉及一种T7噬菌体识别的锚定序列、DNA疫苗重组质粒及应用。本发明利用基因工程方法，调取T7噬菌体基因组左右两侧重复序列中的基因片段，并进行优化组合拼接成候选锚定序列，然后将其插入DNA疫苗质粒载体；建立荧光定量PCR检测方法，评价T7噬菌体对携带候选锚定序列的DNA疫苗载体的包裹效率，最终确定最佳锚定序列。应用T7噬菌体识别锚定序列并包裹DNA疫苗载体，并在细胞上验证T7噬菌体介导DNA疫苗载体转运、表达。本发明的携带锚定序列的DNA疫苗载体可独立于T7噬菌体进行基因的插入或替换，操作方便、运用广泛。
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公开(公告)号：CN113429481B
公开(公告)日：2022-05-31
申请号：CN202110770278.7
申请日：2021-07-07
申请人： 江苏农牧科技职业学院
IPC分类号： C07K16/18 , A61K39/385 , A61P37/04
摘要： 本发明提供一种靶向树突状细胞的纳米抗体分子及应用。所述的靶向树突状细胞纳米抗体分子的氨基酸序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示。本发明构建羊驼源天然纳米抗体T7噬菌体展示文库，利用亲和筛选技术淘选出能够与鸡骨髓DCs高亲和力结合的纳米抗体分子。特异性检测显示筛选到的两个纳米抗体分子不仅跟鸡的DCs有结合能力，跟鸭、鹅等禽类DCs也能结合，而不跟DCs以外的骨髓单核细胞、鸡(鸭、鹅)成纤维细胞结合，具有较好DCs结合特异性。应用该纳米抗体分子作为亚单位抗原载体，能够显著提高抗原分子激发的免疫反应，提高抗体水平。因此，本发明筛选到纳米抗体分子可以作为抗原分子的靶向载体，提高抗原递呈效率，为新型禽类疫苗的开发提供支撑。
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公开(公告)号：CN113604481A
公开(公告)日：2021-11-05
申请号：CN202110770292.7
申请日：2021-07-07
申请人： 江苏农牧科技职业学院
摘要： 本发明属于基因工程技术领域，涉及一种T7噬菌体识别的锚定序列、DNA疫苗重组质粒及应用。本发明利用基因工程方法，调取T7噬菌体基因组左右两侧重复序列中的基因片段，并进行优化组合拼接成候选锚定序列，然后将其插入DNA疫苗质粒载体；建立荧光定量PCR检测方法，评价T7噬菌体对携带候选锚定序列的DNA疫苗载体的包裹效率，最终确定最佳锚定序列。应用T7噬菌体识别锚定序列并包裹DNA疫苗载体，并在细胞上验证T7噬菌体介导DNA疫苗载体转运、表达。本发明的携带锚定序列的DNA疫苗载体可独立于T7噬菌体进行基因的插入或替换，操作方便、运用广泛。
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公开(公告)号：CN113388585A
公开(公告)日：2021-09-14
申请号：CN202110650803.1
申请日：2021-06-10
申请人： 江苏农牧科技职业学院
摘要： 本发明提供一种T7噬菌体高滴度培养方法及其应用。本发明利用基因工程操作方法构建表达gene17.5串联gene19.5编码蛋白的重组大肠杆菌作为补偿宿主，再通过反向遗传方法在补偿宿主中拯救出gene17.5、gene19.5双基因缺失株噬菌体，双基因缺失T7噬菌体感染补偿宿主后在宿主内复制、富集，并在诱导gene17.5、19.5编码蛋白表达后裂解宿主。通过推迟宿主的裂解时间，增加噬菌体在宿主内的复制循环次数达到高滴度培养目的。
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公开(公告)号：CN113429481A
公开(公告)日：2021-09-24
申请号：CN202110770278.7
申请日：2021-07-07
申请人： 江苏农牧科技职业学院
IPC分类号： C07K16/18 , A61K39/385 , A61P37/04
摘要： 本发明提供一种靶向树突状细胞的纳米抗体分子及应用。所述的靶向树突状细胞纳米抗体分子的氨基酸序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示。本发明构建羊驼源天然纳米抗体T7噬菌体展示文库，利用亲和筛选技术淘选出能够与鸡骨髓DCs高亲和力结合的纳米抗体分子。特异性检测显示筛选到的两个纳米抗体分子不仅跟鸡的DCs有结合能力，跟鸭、鹅等禽类DCs也能结合，而不跟DCs以外的骨髓单核细胞、鸡(鸭、鹅)成纤维细胞结合，具有较好DCs结合特异性。应用该纳米抗体分子作为亚单位抗原载体，能够显著提高抗原分子激发的免疫反应，提高抗体水平。因此，本发明筛选到纳米抗体分子可以作为抗原分子的靶向载体，提高抗原递呈效率，为新型禽类疫苗的开发提供支撑。
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