公开(公告)号：CN101857866B

公开(公告)日：2013-04-24

申请号：CN201010156172.X

申请日：2010-04-23

申请人： 江苏省农业科学院

发明人： 刘媛 ,  刘贤金 ,  梁颖 ,  张存政 ,  王耘 ,  温爽

IPC分类号： C12N15/13 ,  C12N15/70 ,  C07K16/14 ,  G01N33/53

摘要： 本发明涉及一种微囊藻毒素LR的单链抗体的筛选方法及其鉴定。是将生物素化的微囊藻毒素LR利用亲和素标记磁珠和负筛选方法，在人源合成抗体库中进行两轮亲和筛选；再对第二轮产出的噬菌体克隆提取总质粒DNA，经过Sfi I酶切后胶回收得到单链抗体基因，与同样酶切后的可溶性表达的载体pAK100CL进行连接，连接后的载体电转化入大肠杆菌XL1-Blue中，获得可溶性表达的单链抗体；用竞争型时间分辨荧光免疫分析法，对可溶性表达的单链抗体进行鉴定。其优点是：本发明具有筛选快速简便，并能更好的将微囊藻毒素LR立体结构暴露于孵育体系中；同时对筛选结果的鉴定，具有检测信号高、抗基质干扰能力强的优点。

公开(公告)号：CN101717448A

公开(公告)日：2010-06-02

申请号：CN200910223819.3

申请日：2009-11-23

申请人： 江苏省农业科学院

发明人： 刘贤进 ,  温爽 ,  张晓 ,  刘媛

IPC分类号： C07K16/44 ,  C12N15/13 ,  G01N33/53 ,  G01N21/31

摘要： 本发明涉及抗体，具体涉及一种伊维菌素的单链抗体hsIVM8及其制备方法、在免疫学检测的应用；本发明为以伊维菌素-牛血清白蛋白结合物为包被抗原包被免疫管，通过固相抗原筛选法从人源噬菌体抗体库Tomlinson J中筛选展示伊维菌素单链抗体的噬菌体，用单克隆ELISA法筛选阳性噬菌体，将阳性噬菌体感染大肠杆菌HB2151进行可溶性抗体的表达，对单链抗体hsIVM8进行纯化，获得伊维菌素的单链抗体hsIVM8。本发明的优点在于：国内外首次报道了伊维菌素的单链抗体hsIVM8制备与免疫学检测方法，与现有的获得抗体的途径相比，该制备方法具有简单、快速、成本低等优点。

公开(公告)号：CN101857866A

公开(公告)日：2010-10-13

申请号：CN201010156172.X

申请日：2010-04-23

申请人： 江苏省农业科学院

发明人： 刘媛 ,  刘贤金 ,  梁颖 ,  张存政 ,  王耘 ,  温爽

IPC分类号： C12N15/13 ,  C12N15/70 ,  C07K16/14 ,  G01N33/53

摘要： 本发明涉及一种微囊藻毒素LR的单链抗体的筛选方法及其鉴定。是将生物素化的微囊藻毒素LR利用亲和素标记磁珠和负筛选方法，在人源合成抗体库中进行两轮亲和筛选；再对第二轮产出的噬菌体克隆提取总质粒DNA，经过Sfi I酶切后胶回收得到单链抗体基因，与同样酶切后的可溶性表达的载体pAK100CL进行连接，连接后的载体电转化入大肠杆菌XL1-Blue中，获得可溶性表达的单链抗体；用竞争型时间分辨荧光免疫分析法，对可溶性表达的单链抗体进行鉴定。其优点是：本发明具有筛选快速简便，并能更好的将微囊藻毒素LR立体结构暴露于孵育体系中；同时对筛选结果的鉴定，具有检测信号高、抗基质干扰能力强的优点。