基于16SrRNA鹌鹑肉源成分PCR扩增鉴定方法和专用引物

    公开(公告)号:CN107345250B

    公开(公告)日:2020-08-21

    申请号:CN201710503231.8

    申请日:2017-06-27

    IPC分类号: C12Q1/6888 C12N15/11

    摘要: 本发明公开了一种快速检测食品中鹌鹑源性成分的方法及专用引物。专用引物见序列表SEQ ID NO 1‑2。针对以鹌鹑肉源DNA为阳性模板,牛、羊、猪、兔、鸽、鸡、鸭和鹅8个物种的DNA为干扰模板的混合模板,分别进行PCR和qPCR反应。其中PCR方法的结果以琼脂糖凝胶电泳图谱中电泳条带为阳性结果,而qPCR方法中以扩增曲线的Ct值小于34的扩增作为阳性结果,检测灵敏度达皮克级DNA。该方法首次利用16S rRNA为目标基因对深加工鹌鹑肉进行检测,所设计引物同时适用于PCR和qPCR方法中,不仅具有良好的特异性,且高度的灵敏性为食品中动物源性成分的鉴定探索了新的途径,具有操作便捷,稳定准确等有益结果。

    一种鸡胚肝细胞体外分离培养及脂肪变性模型建立方法

    公开(公告)号:CN109182247A

    公开(公告)日:2019-01-11

    申请号:CN201811026047.X

    申请日:2018-09-04

    IPC分类号: C12N5/071

    摘要: 本发明公开了细胞毒理技术领域的一种鸡胚肝细胞体外分离培养及脂肪变性模型建立方法。该方法包括如下步骤:(1)取SPF鸡胚;(2)剪碎;(3)消化;(4)离心:弃上清,留取沉淀物加入预热的Williams’E完全培养液重悬,得到细胞悬液B;(5)细胞分离:采用Percoll密度梯度离心;(6)取肝细胞:吸取界面处细胞加入D-Hank’s液吹打混匀,置于离心机离心,弃上清,留取沉淀物加D-Hank’s液冲洗重悬,重复离心2-3次,弃上清,留取沉淀物并加入Williams’E完全培养液,得到细胞悬液C;(7)计数;(8)种板;(9)换液;(10)诱导脂肪变性:种板后30-40h后,更换诱导剂进行培养,培养10-15h,获得脂肪变性肝细胞。本发明能够快速获得原代培养细胞,纯度高,同时诱导时间短。

    一种利用酶切技术鉴定大骨鸡品种的方法及PCR扩增专用引物对

    公开(公告)号:CN107385022A

    公开(公告)日:2017-11-24

    申请号:CN201710503234.1

    申请日:2017-06-27

    IPC分类号: C12Q1/68 C12N15/11

    摘要: 本发明公开了一种利用酶切技术鉴定大骨鸡品种的方法及PCR扩增专用引物对。专用引物见序列表SEQ ID NO 1-2。鉴定方法:利用所述PCR扩增专用引物对大骨鸡样本DNA和待测DNA混合样本同时进行PCR扩增和酶切,然后采用2.0%琼脂糖凝胶电泳检测酶切产物,以大骨鸡样本DNA琼脂糖凝胶电泳图谱中两条电泳条带(294bp,460bp)为阳性结果;将待测DNA混合样本酶切产物电泳图谱与阳性结果进行比对,如果待测样DNA酶切产物琼脂糖凝胶电泳图谱中出现两条电泳条带(294bp,460bp)则认定为纯正的大骨鸡品种。该方法利用本实验室检测到的大骨鸡d-loop区SNP变异位点对待测样本进行PCR扩增酶切检测,所设计引物和酶切酶具有良好的特异性。