公开(公告)号：CN101210243B

公开(公告)日：2012-02-29

申请号：CN200610128463.1

申请日：2006-12-26

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 杨玉荣 ,  姜义宝 ,  梁宏德 ,  王平利 ,  焦喜兰

IPC: C12N15/12 ,  C07K14/465 ,  C07K1/14

Abstract: 一种鸡肠道β-防御素cDNA，其特征在于：具有如下序列，TCAGACAGCCAGCTGTGCAG GAACAACCAT GGCCACTGCC GGAGGCTCTG CTTCCACATGGAGAGCTGGG CTGGGAGCTG CATGAACGGC CGCCTGCGCT GCTGCAGGTTCTCCACCAAG CAGCCCTTTT CCAACCCTAA ACATTCAGTG CTGCACACAGCAGAGCAGGA CCCTTCCCCA AGCCTTGGAG GGACGTGA。该β-防御素的氨基酸序列特征是：Ser-Asp-Ser-Gln-Leu Cys-Arg-Asn-Asn-His Gly-His-Cys-Arg-ArgLeu-Cys-Phe-His-Met Glu-Ser-Trp-Ala-Gly Ser-Cys-Met-Asn-Gly Arg-Leu-Arg-Cys-CysArg-Phe-Ser-Thr-Lys-Gln Pro-Phe-Ser-Asn-Pro Lys-His-Ser-Val-Leu His-Thr-Ala-Glu-GlnAsp-Pro-Ser-Pro-Ser Leu-Gly-Gly-Thr。其提取方法，包括以下步骤：A、收集破碎鸡肠道黏膜细胞，B、之后破碎小囊泡。C、5％乙酸搅拌浸提，离心，取上清，弃沉淀，上清液分装冻存，即为鸡肠道β-防御素粗提物。D、低温下将上清液上样于Sephadex G-100凝胶柱，用0.2mol/L乙酸钠洗脱，恒流泵的速度为3×1，经核酸蛋白检测仪检测后自动收集器收集，每管1.5mL，记录仪记录(速度为6cm/h，量程20mv)。E、通过琼脂糖弥散方法检测各收集管液体对巴氏杆菌的抗菌活性，收集有抑菌作用的洗脱液，真空冷冻干燥保存。F、有抑菌作用的洗脱液进行Tricine-PAGE纯化，蛋白条带电转印至PVDF膜，采用Sanger水解逐段分析法做氨基酸序列分析。G、BLAST软件推导鸡肠道β防御素cDNA序列。

公开(公告)号：CN101210243A

公开(公告)日：2008-07-02

申请号：CN200610128463.1

申请日：2006-12-26

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 杨玉荣 ,  姜义宝 ,  梁宏德 ,  王平利 ,  焦喜兰

IPC: C12N15/12 ,  C07K14/465 ,  C07K1/14

Abstract: 一种鸡肠道β－防御素cDNA，其特征在于：具有如下序列，TCAGACAGCC AGCTGTGCAG GAACAACCAT GGCCACTGCC GGAGGCTCTG CTTCCACATG GAGAGCTGGG CTGGGAGCTG CATGAACGGC CGCCTGCGCT GCTGCAGGTT CTCCACCAAG CAGCCCTTTT CCAACCCTAA ACATTCAGTG CTGCACACAG CAGAGCAGGA CCCTTCCCCA AGCCTTGGAG GGACGTGA。该β－防御素的氨基酸序列特征是：Ser－Asp－Ser－Gln－Leu Cys－Arg－Asn－Asn－His Gly－His－Cys－Arg－Arg Leu－Cys－Phe－His－Met Glu－Ser－Trp－Ala－Gly Ser－Cys－Met－Asn－Gly Arg－Leu－Arg－Cys－Cys Arg－Phe－Ser－Thr－Lys－Gln Pro－Phe－Ser－Asn－Pro Lys－His－Ser－Val－Leu His－Thr－Ala－Glu－Gln Asp－Pro－Ser－Pro－Ser Leu－Gly－Gly－Thr。其提取方法，包括以下步骤：A.收集破碎鸡肠道黏膜细胞，B.之后破碎小囊泡。C.5％乙酸搅拌浸提，离心，取上清，弃沉淀，上清液分装冻存，即为鸡肠道β－防御素粗提物。D.低温下将上清液上样于Sephadex G－100凝胶柱，用0.2mol/L乙酸钠洗脱，恒流泵的速度为3×1，经核酸蛋白检测仪检测后自动收集器收集，每管1.5mL，记录仪记录(速度为6cm/h，量程20mv)。E.通过琼脂糖弥散方法检测各收集管液体对巴氏杆菌的抗菌活性，收集有抑菌作用的洗脱液，真空冷冻干燥保存。F.有抑菌作用的洗脱液进行Tricine－PAGE纯化，蛋白条带电转印至PVDF膜，采用Sanger水解逐段分析法做氨基酸序列分析。G.BLAST软件推导鸡肠道β防御素cDNA序列。

公开(公告)号：CN101199558A

公开(公告)日：2008-06-18

申请号：CN200610128389.3

申请日：2006-12-15

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 杨玉荣 ,  姜义宝 ,  梁宏德 ,  王平利 ,  焦喜兰

IPC: A61K36/064 ,  A23K1/16 ,  A61P37/02 ,  A61P43/00 ,  C12N1/16 ,  C12N1/20 ,  A61K35/74

Abstract: 一种禽用复合益生菌制剂，按数量份由以下益生菌组份和数量组成：嗜酸乳杆菌25－35、干酪乳杆菌15－25、纤维二糖乳杆菌10－20、蜡样芽孢杆菌10－20、地衣芽孢杆菌5－15、酵母菌5－15，活菌数≥80亿/克。复合益生菌制剂的制备方法，包括以下步骤：A.分别取嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、纤维二糖乳杆菌、蜡样芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌及酵母菌种子；B.分别将上述益生菌种子活化；C.将活化的益生菌种子培养；D.分别进行50升体系培养；E.将培养好的益生菌混合；F.将混合益生菌包被；G.将包被好的益生菌干燥。本发明含有芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌，各组分按比例配合，好氧型和厌氧型并存，功能广泛。