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公开(公告)号：CN111454874A
公开(公告)日：2020-07-28
申请号：CN202010151107.1
申请日：2020-03-06
Applicant: 河南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种单核、二核及成熟玉米花粉分离方法及花粉发育阶段判定模型的构建与应用。在花粉分离纯化方法中合理设置相容的样品研磨-分离-纯化缓冲体系，以有效的保持花粉细胞的活性，并有利于后续步骤实施；本发明研究发现了玉米植株叶环数、雄穗中部小穗长度、花粉直径与花粉发育阶段之间存在关联性，并分别建立了玉米花粉发育阶段定量数值化的判定模型和简便快捷的直观判断法，其中，模型判定法能准确判断玉米花粉所处发育时期，而直观判断法不破坏玉米雄穗、损伤包叶（叶环数、小穗长度等指标易于考察获取），操作简单、直观，解决了传统的判定方法必须破坏玉米雄穗（如要取出由叶片包裹的雄穗还必须破坏叶片）的技术难题。
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公开(公告)号：CN111454874B
公开(公告)日：2021-03-12
申请号：CN202010151107.1
申请日：2020-03-06
Applicant: 河南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种单核、二核及成熟玉米花粉分离方法及花粉发育阶段判定模型的构建与应用。在花粉分离纯化方法中合理设置相容的样品研磨‑分离‑纯化缓冲体系，以有效的保持花粉细胞的活性，并有利于后续步骤实施；本发明研究发现了玉米植株叶环数、雄穗中部小穗长度、花粉直径与花粉发育阶段之间存在关联性，并分别建立了玉米花粉发育阶段定量数值化的判定模型和简便快捷的直观判断法，其中，模型判定法能准确判断玉米花粉所处发育时期，而直观判断法不破坏玉米雄穗、损伤包叶（叶环数、小穗长度等指标易于考察获取），操作简单、直观，解决了传统的判定方法必须破坏玉米雄穗（如要取出由叶片包裹的雄穗还必须破坏叶片）的技术难题。
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公开(公告)号：CN111440759B
公开(公告)日：2021-01-15
申请号：CN202010151105.2
申请日：2020-03-06
Applicant: 河南农业大学
IPC: C12N5/04
Abstract: 本发明公开了一种同时分离提取细胞核和叶绿体的方法，旨在解决现有分离提取方法中无法同时分离出高活性细胞核和叶绿体技术问题，其主要步骤包括：（1）取植株幼苗或叶片，剪碎后加入破碎缓冲液，研磨破碎后过滤得匀浆液，再经离心分离，弃上清液得沉淀物；（2）向上步骤所得沉淀物中加入分离缓冲液混匀得到重悬液，再将所述重悬液加至Percoll密度梯度分离液的上面，进行梯度离心分离；（3）分别抽取分离液梯度交接面处的叶绿体和底部沉淀物，再分别加入纯化缓冲液进行离心纯化分离，去上清液得对应的叶绿体和细胞核。本发明利用不同缓冲液对细胞核和叶绿体的分离提纯，具有操作简便，所得到的纯化后细胞核提取率高达80%，叶绿体的提取率高达90%。
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公开(公告)号：CN111440759A
公开(公告)日：2020-07-24
申请号：CN202010151105.2
申请日：2020-03-06
Applicant: 河南农业大学
IPC: C12N5/04
Abstract: 本发明公开了一种同时分离提取细胞核和叶绿体的方法，旨在解决现有分离提取方法中无法同时分离出高活性细胞核和叶绿体技术问题，其主要步骤包括：（1）取植株幼苗或叶片，剪碎后加入破碎缓冲液，研磨破碎后过滤得匀浆液，再经离心分离，弃上清液得沉淀物；（2）向上步骤所得沉淀物中加入分离缓冲液混匀得到重悬液，再将所述重悬液加至Percoll密度梯度分离液的上面，进行梯度离心分离；（3）分别抽取分离液梯度交接面处的叶绿体和底部沉淀物，再分别加入纯化缓冲液进行离心纯化分离，去上清液得对应的叶绿体和细胞核。本发明利用不同缓冲液对细胞核和叶绿体的分离提纯，具有操作简便，所得到的纯化后细胞核提取率高达80%，叶绿体的提取率高达90%。
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