公开(公告)号：CN109355246A

公开(公告)日：2019-02-19

申请号：CN201811394334.6

申请日：2018-11-21

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 史勇 ,  金维环 ,  陈彦惠 ,  任真真 ,  刘姣姣 ,  王林会

IPC: C12N5/04 ,  C12N15/82 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明公开了一种拟南芥叶肉细胞原生质体的制备方法，具体步骤如下：剪取3-5周的拟南芥叶片用无弹性的纸质胶带或布质胶带固定叶片的上表皮和下表皮；轻轻撕掉叶片下表皮的无弹性的纸质胶带或布质胶带，将剪好的叶片放入含有酶解液的培养皿中；将放有叶片的培养皿置于摇床中培养30-90min或者直至绝大部分或全部原生质体从叶片上脱离下来为止；将含有原生质体的酶解液转移到圆底离心管中，离心收集原生质体；用预冷的W5溶液清洗原生质体，用W5溶液重悬原生质体并在冰上放置最少30分钟。本发明将原生质体置于黑暗条件下培养，有效解决了光照培养引起的细胞死亡和凝聚现象，能极大的提高转化效率。

公开(公告)号：CN109355246B

公开(公告)日：2022-02-11

申请号：CN201811394334.6

申请日：2018-11-21

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 史勇 ,  金维环 ,  陈彦惠 ,  任真真 ,  刘姣姣 ,  王林会

IPC: C12N5/04 ,  C12N15/82 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明公开了一种拟南芥叶肉细胞原生质体的制备方法，具体步骤如下：剪取3‑5周的拟南芥叶片用无弹性的纸质胶带或布质胶带固定叶片的上表皮和下表皮；轻轻撕掉叶片下表皮的无弹性的纸质胶带或布质胶带，将剪好的叶片放入含有酶解液的培养皿中；将放有叶片的培养皿置于摇床中培养30‑90min或者直至绝大部分或全部原生质体从叶片上脱离下来为止；将含有原生质体的酶解液转移到圆底离心管中，离心收集原生质体；用预冷的W5溶液清洗原生质体，用W5溶液重悬原生质体并在冰上放置最少30分钟。本发明将原生质体置于黑暗条件下培养，有效解决了光照培养引起的细胞死亡和凝聚现象，能极大的提高转化效率。