公开(公告)号：CN105510579A

公开(公告)日：2016-04-20

申请号：CN201510865428.7

申请日：2015-12-02

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 王英华 ,  杨玉荣 ,  冯永杰 ,  刘书平 ,  赵永静 ,  郭锋 ,  王灵敏 ,  王辉 ,  玉苏甫 ,  依布拉英

IPC: G01N33/569

CPC classification number: G01N33/56905 ,  G01N2333/45

Abstract: 本发明公开了1、一种弓形虫血清学检测方法，包括下述步骤：A、待检血清样品的获得、B、待检血清、阳性血清及阴性血清的梯度稀释、C、弓形虫抗原混合液的配制、D、梯度血清与抗原混合液1:1反应、E、封板并37℃温箱过夜、F、阳性样品的判定，本发明技术的积极效果是：1、弓形虫抗原为虫体全抗原，检测滴度高，检测灵敏度高；2、操作简便，不需要高端设备和仪器，成本较低；3、阳性、阴性结果对比明显，便于观察记录；4、自然溶血的血清样品不影响最终的结果。

公开(公告)号：CN105420112A

公开(公告)日：2016-03-23

申请号：CN201510951547.4

申请日：2015-12-17

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 杨玉荣 ,  王英华 ,  冯永杰 ,  付晓莹 ,  马超锋 ,  郭锋 ,  李尚超 ,  陆瑶瑶

IPC: C12N1/10 ,  C12R1/90

CPC classification number: C12N1/10

Abstract: 本发明公开了一种刚地弓形虫虫株的分离方法，包括以下步骤：A、弓形虫阳性动物样品的获得，B、弓形虫阳性动物心肌消化液的获得，C、昆明小鼠皮下接种弓形虫阳性动物心肌消化液，D、昆明小鼠皮下接种弓形虫阳性动物心肌消化液，E、接种后昆明小鼠的阶段性护理，F、接种后昆明小鼠弓形虫阳性检测；本发明投入成本较低；能够有大范围高效地筛选弓形虫阳性动物样品；分离出新型弓形虫虫株的程序简单，效果显著，便于常规条件操作；能够更方便地为弓形虫疫苗研究提供新型弓形虫虫株；本发明采用胃蛋白酶消化的方法，可以接种50克或超过50克的组织；背部接种小鼠降低了小鼠的死亡率。

公开(公告)号：CN107119042A

公开(公告)日：2017-09-01

申请号：CN201710272487.2

申请日：2017-04-24

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 杨玉荣 ,  王英华 ,  李志勇 ,  杨治冬 ,  王荣华 ,  陈奎 ,  陆瑶瑶 ,  董辉

IPC: C12N15/10

Abstract: 本发明公开了种提取弓形虫卵囊核酸的方法：A、样品的冻融；B、裂解样品；C、提取核酸；D、核酸的检测；裂解步骤如下：取样品剪碎，放入EP管内，加入缓冲液A，加入Proteinase K，加入3 mol/L乙酸钠缓冲液，溶液变清亮卵囊裂解较彻底；提取核酸步骤：向EP管内加入无水乙醇振荡使DNA析出；吸附柱吸附，离心；向吸附柱中分别加入缓冲液70％乙醇沉淀核酸，100％乙醇缓冲液，并离心，向吸附膜的中间部位悬空滴加缓冲液溶解核酸，离心，得弓形虫卵囊核酸DNA，本发明方法简便易行、有效地提取弓形虫卵囊核酸，提高粪便、土壤、水体、蔬菜和水果等样品弓形虫检测的准确性。

公开(公告)号：CN105296356A

公开(公告)日：2016-02-03

申请号：CN201510865451.6

申请日：2015-12-02

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 杨玉荣 ,  王英华 ,  付晓莹 ,  郭锋 ,  冯永杰 ,  仲伟平 ,  郝立宾 ,  马超锋 ,  刘书平 ,  韦景平 ,  王凯 ,  陆瑶瑶

IPC: C12N1/10

Abstract: 本发明公开了一种刚地弓形虫卵囊的制备、纯化及保存方法，包括以下步骤：A、弓形虫包囊的获得；B、弓形虫阴性猫的获得；C、弓形虫包囊饲喂猫；D、收集1-21天粪便；E、从粪便分离弓形虫卵囊：F、弓形虫卵囊的保存。本发明的弓形虫卵囊活性好，可长期保存于4度冰箱，保存期大于5年，能提供良好的弓形虫疫苗研究和制备素材；该方法人工操作简便易行，所采用的材料易于得到；制备及纯化弓形虫卵囊过程易于控制，范围较小，并对接触过的材料、器皿进行无害化处理，避免了对环境污染。