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公开(公告)号：CN104962580A
公开(公告)日：2015-10-07
申请号：CN201510371509.1
申请日：2015-06-30
申请人： 浙江大学
摘要： 本发明公开了一种重组植物弹状病毒载体及其构建方法。重组植物弹状病毒载体，包括：a）一个修饰的植物弹状病毒基因组；b）一个新引入的转录单元，它被插入植物弹状病毒基因组中表达异源的核酸序列；c）一个异源核酸序列，它被置换到所述的重组植物弹状病毒的糖蛋白转录单元，其中所述的重组植物弹状病毒具有复制和侵染能力，所述的异源核酸序列编码一个抗原性多肽或其它蛋白。本发明病毒表达载体是第一个能在植物上表达外源蛋白的负义RNA病毒载体，具有表达量高，表达稳定性好，可以插入较长的外源基因片段，且插入的外源基因片段不易丢失等方面的特点，可以用于表达多种外源蛋白，也可以用于制备动物疫苗，具有广阔的应用价值和应用前景。
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公开(公告)号：CN105039388A
公开(公告)日：2015-11-11
申请号：CN201510371359.4
申请日：2015-06-30
申请人： 浙江大学
摘要： 本发明公开了一种重组单链负义植物病毒侵染性克隆构建方法及质粒和病毒。在植物细胞中导入质粒载体的混合物，包括（i）一种转录载体，所述转录载体包括一种分离的核酸分子，该核酸分子中含有编码单链负义植物病毒反基因组的多核苷酸序列，（ii）至少一种表达载体，包括编码所述单链负义植物病毒衣壳包装、转录和复制所必需的反式作用蛋白，和（iii）可以抑制植物体内基因沉默的沉默抑制子蛋白的多核苷酸序列的一种或多种分离的核酸分子。质粒载体组合物导入植物细胞后可以大量产生重组植物负链RNA病毒；侵染性克隆能高效侵染至少一种以上的植物，无需昂贵的仪器、操作简单、重复性好；利用侵染性克隆可有效用于植物负链RNA病毒的反向遗传学研究。
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公开(公告)号：CN115397997A
公开(公告)日：2022-11-25
申请号：CN202180007363.6
申请日：2021-02-23
申请人： 浙江大学
摘要： 本发明公开了一种利用植物弹状病毒载体对植物染色体DNA进行定点修饰的方法及病毒载体组合物。本发明提供了对植物基因组目的DNA进行定点编辑的方法，该方法无需引入选择性标记基因，包括如下步骤：利用植物弹状病毒载体系统侵染植物并表达序列特异性的核酸酶，所述序列特异性核酸酶靶向所述被侵染植物基因组靶位点并切割靶位点，植物的DNA修复机制完成对所述靶位点的定向编辑。本发明利用植物弹状病毒表达载体递送序列特异性核酸酶，不仅提高了对靶位点的编辑效率，而且可获得非转基因的可稳定遗传的编辑植株。
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公开(公告)号：CN105039388B
公开(公告)日：2019-06-18
申请号：CN201510371359.4
申请日：2015-06-30
申请人： 浙江大学
摘要： 本发明公开了一种重组单链负义植物病毒侵染性克隆构建方法及质粒和病毒。在植物细胞中导入质粒载体的混合物，包括（i）一种转录载体，所述转录载体包括一种分离的核酸分子，该核酸分子中含有编码单链负义植物病毒反基因组的多核苷酸序列，（ii）至少一种表达载体，包括编码所述单链负义植物病毒衣壳包装、转录和复制所必需的反式作用蛋白，和（iii）可以抑制植物体内基因沉默的沉默抑制子蛋白的多核苷酸序列的一种或多种分离的核酸分子。质粒载体组合物导入植物细胞后可以大量产生重组植物负链RNA病毒；侵染性克隆能高效侵染至少一种以上的植物，无需昂贵的仪器、操作简单、重复性好；利用侵染性克隆可有效用于植物负链RNA病毒的反向遗传学研究。
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公开(公告)号：CN104962580B
公开(公告)日：2018-04-27
申请号：CN201510371509.1
申请日：2015-06-30
申请人： 浙江大学
摘要： 本发明公开了一种重组植物弹状病毒载体及其构建方法。重组植物弹状病毒载体，包括：a）一个修饰的植物弹状病毒基因组；b）一个新引入的转录单元，它被插入植物弹状病毒基因组中表达异源的核酸序列；c）一个异源核酸序列，它被置换到所述的重组植物弹状病毒的糖蛋白转录单元，其中所述的重组植物弹状病毒具有复制和侵染能力，所述的异源核酸序列编码一个抗原性多肽或其它蛋白。本发明病毒表达载体是第一个能在植物上表达外源蛋白的负义RNA病毒载体，具有表达量高，表达稳定性好，可以插入较长的外源基因片段，且插入的外源基因片段不易丢失等方面的特点，可以用于表达多种外源蛋白，也可以用于制备动物疫苗，具有广阔的应用价值和应用前景。
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